摘要:
目的：探讨宫颈上皮细胞游离亚铁原卟啉/活性氧自由基(FH/ROS)联合检测在宫颈癌及癌前病变中的临床应用价值。方法：2019年3月至2019年6月遵义医科大学附属妇幼保健院(遵义市妇幼保健院)妇科接受宫颈癌筛查的女性患者360例，选取同时具有TCT检测及病理检查结果的300例，对其FH/ROS联合检测，以病理学诊断结果作为金标准，分析FH/ROS联合检测和TCT对宫颈癌与CIN检测的灵敏度、特异度、准确度。结果：上皮细胞FH/ROS联合检测阳性率高于TCT (P < 0.05)，其灵敏度、特异度、准确度分别是100%、85.7%、91.3%，TCT检测的灵敏度、特异度、准确度分别为82.05%、81.4%、85.3%。结论：FH/ROS联合检测作为宫颈癌筛查方法具有简便快速，检测成本较低，灵敏度较高等特点，值得临床推广应用。
Abstract:
Objective: To investigate
the clinical significance of free ferrous porphyrin/reactive oxygen free
radical (FH/ROS) combined test in cervical cancer screening. Methods: A total
of 300 women pathologically diagnosed with cervical intraepithelial neoplasia
(CIN), cervical cancer and normal cervix were detected by FH/ROS combined test
and thin-prep cytology test (TCT). The sensitivity, specificity and accuracy of
TCT and FH/ROS combined test for cervical lesions were compared. Results: The
positive rate of FH/ROS combined test was higher than TCT (P < 0.05), the sensitivity, specificity and accuracy of FH/ROS combined test were 100%, 85.7% and 91.3%, respectively, and the sensitivity, specificity and accuracy of TCT were 82.05%, 81.4% and 85.3% respectively. Conclusion: FH/ROS combined test has simple, fast, low-cost advantages and high sensitivity of detection, which is worthy to be used as clinical early warning detection technology in cervical cancer screening.
1. 引言
宫颈癌是妇科常见的生殖道恶性肿瘤之一，发病率在全球妇女恶性肿瘤中排名第二。近年来，宫颈癌发病逐渐呈年轻化趋势。宫颈癌前病变主要是指宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia, CIN)，大部分低级别CIN可自然消退，但高级别CIN具有较大可能发展为浸润癌。宫颈癌发生多由人乳头瘤病毒感染所致，而发展至浸润癌是一个相对漫长的过程，因此采取有效的宫颈癌筛查方法，早诊早治，可以人为干预控制宫颈癌的发病率及病死率。目前常用临床宫颈癌筛查方法是宫颈液基薄层细胞检测(Thinprep cytologic test, TCT)技术。细胞游离亚铁原卟啉(free ferrous protopor-phyrin, FH)和活性氧自由基(reactive oxygen species, ROS)含量同细胞癌变程度有密切关系，含量越高，癌变越严重，对宫颈癌的早期筛查有重要预示作用 [1] [2] [3] 。宫颈上皮细胞FH/ROS联合检测主要是对细胞FH和ROS物质通过比色法进行检测，相关临床研究少有报道。本研究报道了对宫颈癌筛查患者进行FH/ROS联合检测，以病理学诊断结果作为金标准，以分析FH/ROS联合检测和TCT对宫颈癌与CIN检测的灵敏度、特异度、准确度，从而了解探讨该检测在宫颈癌及癌前病变中的临床应用价值。
2. 资料与方法
2.1. 一般资料
2019年3月至2019年6月本院妇科接受宫颈癌筛查的女性患者360例。纳入标准：经病理学诊断为宫颈癌、CIN患者及TCT检查正常者总计300例，有性生活史；排除标准：处于月经期者、经间出血、宫颈息肉、重度宫颈糜烂、宫颈溃疡、宫颈创伤、黏膜下子宫肌瘤等易大量出血者导致假阳性者。其中，病理学诊断：宫颈癌患者9例，年龄25~55岁，平均45岁；CIN患者108例，年龄22~60岁，平均44岁；TCT检查正常者183例，年龄21~60岁，平均38岁。
2.2. 方法
2.2.1. TCT检测
将宫颈刷置入宫颈管1 cm左右，采集宫颈上皮脱落细胞，将细胞转移到装有细胞保存液中送检，通过自动细胞制片，染色固定，最后于光学显微镜下进行观察，由病理科专业医师统一阅片诊断。诊断标准采用国际细胞病理学会修订的报告系统(The Bethesda System, TBS)。
2.2.2. 病理学检查
阴道镜下选择宫颈鳞–柱交接部的3、6、9、12点处取活检组织标本，按常规组织石蜡切片及HE染色进行，在光镜下观察组织病理学形态，并做出病理诊断。诊断结果分为：宫颈上皮正常、CIN I~III和宫颈癌。
2.2.3. FH/ROS联合检测
上皮细胞ROS + FH染色试剂盒购于深圳海柔思生物医学科技有限公司，宫颈刷取上皮脱落细胞，置于细胞保存液中，操作步骤严格按照试剂盒的进行，FH和ROS均为阳性判定为阳性。
2.3. 统计学方法
采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计量资料用均数 ± 标准差(x ± s)表示，两组间比较采用t检验，计数资料以率(%)表示；组间比较采用X2检验，以P < 0.05为差异有统计学意义。
3. 结果
3.1. 上皮细胞FH/ROS和TCT在宫颈病变中的阳性率
在300例样本中，统计分析FH/ROS和TCT阳性检出和阳性率。FH/ROS联合检测在宫颈癌及癌前病变中阳性检出143例，阳性率为47.7%。与TCT (119例，阳性率39.7%)、阴道镜 + 组织学活检(117例，阳性率39%)相比，FH/ROS联合检测阳性检出率更高，差异有统计学意义(P < 0.05)，结果见表1。
Table 1. FH and TCT compared with pathological results (N)
表1. 上皮细胞FH/ROS和TCT与病理检测结果(例)
3.2. 上皮细胞FH/ROS和TCT检测与病理学诊断评价
以病理学诊断为金标准，评价和比较两种检测方法与病理学诊断的一致性，结果见表2。上皮细胞FH/ROS联合检测灵敏度、特异度、准确度分别是100%，85.7%，91.3%，TCT检测检测灵敏度、特异度、准确度、分别为82.05%，81.4%，85.3%。结果表明，与TCT相比，FH/ROS联合检测灵敏度显著优于TCT (P < 0.05)，但特异性略逊于TCT，无明显差异(P > 0.05)，总体上，FH/ROS联合检测准确度高于TCT。
Table 2. Evaluation of FH/ROS and TCT with pathologic diagnosis (N, %)
表2. 上皮细胞FH/ROS和TCT检测与病理学诊断评价(例，%)
4. 结论
宫颈癌是目前我国最常见的妇科生殖道恶性肿瘤，对女性患者的健康造成了严重威胁。高危HPV感染是其主要发病因素，宫颈癌的发生发展是一个长期渐进过程，因此筛查仍是目前预防宫颈癌的最佳策略，高效快捷的筛查方法是宫颈癌治疗的前提保证 [4] [5] 。目前临床上常用的宫颈癌筛查方法主要包括宫颈细胞学检查、HPV检测以及阴道镜及活检等，TCT是目前应用最普遍的筛查手段，主要基于细胞形态学判断宫颈病变情况，受细胞学阅片对细胞异常形态主观判断的影响，易漏诊和误诊，对CIN和宫颈癌诊断有一定的限制，而且操作时间较长繁琐，成本相对较高。上皮细胞FH/ROS检测则属于近年出现的新型宫颈癌前病变筛查方法，通过检测FH和ROS物质的产生可以显示病变的发生 [6] [7] 。
本研究结果表明与常规筛查方法相比，FH/ROS联合检测阳性检出率更高。与TCT相比，FH/ROS联合检测灵敏度和准确度优于TCT，说明上皮细胞FH/ROS检测具有较高的临床诊断价值，是一种可靠的筛查手段。FH是细胞游离亚铁原卟啉物质，含亚铁原卟啉癌基因蛋白的分解产物。上皮细胞发生恶性病变后，细胞稳定性进而失调，原癌基因蛋白质发生构象变化，蛋白中的亚铁原卟啉辅基会发生脱落，导致各种上皮细胞内FH物质含量增高 [8] [9] 。ROS为活性氧物质，在正常条件下，机体保持着活性氧产生与清除的平衡机制，当致病因子导致这种平衡被破坏时，致使细胞内活性氧积聚过多，其活性氧就会对蛋白质、核酸及脂质等生物大分子物质造成损伤，致使细胞稳定性失调，严重者会使癌基因表达，癌基因蛋白产生，导致细胞恶性病变 [10] 。上皮细胞恶性病变后，胞内的ROS与FH物质会增加，并且与病变呈正相关，检测上皮细胞中ROS与FH物质是否增多，进而可以了解上皮细胞是否异常。有研究发现，上皮细胞FH检测在宫颈癌及CIN患者的临床诊断中有较高的临床准确率，本研究结果与之相符。通过FH和ROS等代谢物检测，实现了对宫颈癌超早期的筛查，弥补了目前临床上主要应用形态学方法筛查宫颈癌所存在的不足。此外，FH/ROS检测无需专业医务人员和专业仪器设备，医疗投入少，操作简便快捷，与TCT相比减少了70%的工作量和时间，非常适合于宫颈癌规模化筛查。
综上所述，FH/ROS联合检测对宫颈癌检测有较高的准确度、灵敏度、特异度，具有较高的临床价值，可以作为一种简捷快速、经济有效的定性筛查方法应用，以提高宫颈癌的检出率，值得临床推广应用。