款冬花化学成分的研究

Study on Chemical Constituents of Tussilago farfara L.

摘要: 目的：研究款冬花中的化学成分。方法：综合应用反相色谱、Sephadex LH-20、液相和半制备液相等多种化学色谱方法进行分离纯化，并根据化合物的理化性质和核磁共振波谱进行结构鉴定。结果：从款冬花的95%乙醇提取物中分离得到20个化合物，通过波谱分析等手段鉴定了15个化合物，包括12个倍半萜，2个脂肪酸和1个生物碱。结论：化合物6和15为首次从款冬花中分离得到的。

Abstract: Objective: To study the constituents of Tussilago farfara L. Methods: The compounds were isolated and purified by column chromatography of Sephadex LH-20, HPLC and semi-preparative RP-HPLC. Their structures were elucidated by physicochemical properties and spectral analyses. Results: By the means of chromatography methods and spectroscopic evidence, 20 compounds were isolated from 95% EtOH of T. farfara. We identified 15 compounds by spectroscopic analysis, 12 of which were sesquiterpenoids. Conclusion: Compounds 6 and 15 are identified from Tussilago farfara L. for the first time.

1. 引言

倍半萜类化合物由三个异戊二烯单位构成，含有15个碳原子。主要分布在植物界和微生物界，多以挥发油形式存在。这些年，对此类化合物的研究较快，每年发现的新型种类数目成倍增长，无论是化合物的数目还是骨架类型都是萜类化合物中最多的一类 [1]。倍半萜类广泛存在于菊科植物中，并表现出有趣的化学多样性和重要的生物学特性，这使它们成为植物化学、药理学，及合成的主要目标 [2]。

款冬花系菊科款冬属植物款冬(Tussilago farfara L.)的花蕾，是一种多年生草本植物，通常在10月下旬至12月下旬花尚未出土时采挖，主要分布于中国，欧洲和北非。款冬花中含有最多的成分是倍半萜，也是化学和药理研究最深入的一部分。根据其中所含有的倍半萜母核，主要以oplopane骨架和bisabolane骨架为主。款冬花中已报道的oplopane型倍半萜共有四十多个，占已报道倍半萜的一半以上。此类倍半萜的不同之处在于其取代基的位置变化，结构变化主要发生在1、7和14位。款冬花中报道的倍半萜中也有少部分是bisabolane型，该类倍半萜的结构特点是在1、5位和8位容易氧化，1位和8位大多酰化成酯。近年来，也有学者从款冬花植物中发现了两个新颖结构的oplopane型倍半萜和一个新颖的bisabolane型倍半萜 [3]。除了oplopane型和bisabolane型倍半萜外，款冬花中还报道了eudesmane型 [4] 倍半萜和guaiane型 [5] 倍半萜。我们对在陕西药材市场采购的款冬花进行了化学成分研究，从中分离得到了20个化合物，通过波谱分析手段最终鉴定了15个化合物(如图1)，分别为：6,10-Octadecadienoic acid (1) [6]、Hexadecanoic acid (2) [7]、Senkirkine (3) [8]、(-)-cryptomerion (4) [9]、2,2-dimethyl-6-acetylhromanone (5) [10]、β-oploplenone (6) [11]、7β-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-14-hydroxy-notonipetranone (7) [12]、14-acetoxy-7β-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-1α-(2-methylbutyryloxy)-notonipetranone (8) [12]、tussilagone (9) [13]、7β-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-1α-(2-methylbutyryloxy)-3(14)-dehydro-Z-notonipetrane (10) [13]、(1R,3R,4R,5S,6S)-1,5-diacetoxy-8-angeloyloxy-3,4-epoxybisabola-7(14),10-dien-2-one (11) [14]、(1R,3R,4R,5S,6S)-1-acetoxy-8-angeloyloxy-3,4-epoxy-5-hydroxybisabola-7(14),10-dien-2-one (12) [14]、1β,8-bisangeloyloxy-3α,4α-epoxybisabola-7(14),10-dien-2-one (13) [3]、1β-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-8-angeloyloxy-3α,4α-epoxybisabola-7(14),10-dien-2-one (14) [3]、(4R,6E)-2-acetoxy-8-angeloyloxy-4-hydroxybisabola-2,6,10-trien-1-one (15) [15]。其中，化合物6和15为首次从款冬花中分离得到的。

2. 仪器与试剂

1D和2D NMR在Bruker AM-400、DRX-500或Bruker AM-600核磁共振仪上测定，TMS作为内标，δ为ppm，J为Hz；ESI-MS在Burker HCT或Esquire质谱仪上测定；高分辨质谱在Auto-Spec Premier P776质谱仪上测定；拌样及层析用硅胶(100~200，200~300目)，均为青岛海洋化工厂生产；反相填充材料RP-18为40~60 μm，Merk公司生产；MCI填充材料为MCI-gel CHP-20P；HPLC分析仪器为Agilent 1260型高效液相色谱仪，色谱柱为Agilent公司的ZORBAX SB-C18反相柱。凝胶为Sephadex LH-20；显色剂非碱为10% H₂SO₄的乙醇溶液，喷洒后适当加热；生物碱常用显色剂：Dragendorff's，沾湿后显色。

3. 提取与分离

干燥款冬花10 kg，粉碎后用95%的乙醇提取三次(25 L/次)，合并提取液，减压蒸馏除去有机溶剂，用乙酸乙酯进行萃取，得到粗提物143.7 g，以聚酰胺拌样，以甲醇水系统(30%~100%)在MCI柱上进行梯度洗脱，以TLC进行检测，合并相同组分得到三个馏分：I-III。对萃取后的水层进行酸碱处理，酸层用乙酸乙酯萃取三次，得水层进行碱处理，并用氯仿萃取三次，得到生物碱5.3 g。

馏分I段有部分结晶，得到化合物2 (1.5 g)。

Figure 1. Obtained structural expressions of 15 compounds

图1. 分离得到15个化合物的结构式

馏分II段有小部分结晶，得到化合物9 (2.4 g)。将未结晶的部分，以聚酰胺拌样，以甲醇–水系统(75%~100%)在RP-18柱上进行梯度洗脱，以TLC进行检测，合并相同组分得到I-a、I-b、I-c、I-d和I-e。I-a经过多次硅胶柱层析后得到化合物10 (2.3 g)，4 (4.1 mg)和1 (28.9 mg)。以甲醇-水系统(82：28，流速3 mL/min)在分析型HPLC对I-b段进行半制备后得到化合物14 (20.0 mg, tR = 12.6 min)，13 (20.0 mg, tR = 11.2 min)，和8 (3.8 mg, tR = 15.1 min)。I-c以氯仿为洗脱剂进行柱层析后得到化合物5 (65.2 mg)和混合物，以甲醇-水系统(70:30，流速4 mL/min)在分析型HPLC对混合物进行半制备后得到化合物11 (10.6 mg, tR = 11.9 min)。I-c经过多次硅胶柱层析和半制备后得到化合物6 (27.3 mg)和7 (43.2 mg, tR = 11.8 min)。对I-e段进行半制备(甲醇-水75:25，流速4 mL/min)得到化合物12 (22.2 mg, tR = 10.8 min)和15 (3.4 mg, 15.3 min)

生物碱部分经过多次硅胶柱层析后得到化合物3 (1.1 g)。

4. 结构鉴定

6,10-Octadecadienoic acid (1)：无色油状物，C₁₈H₃₂O₂∙¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H：6~5.35 (4H, m, H-9, 10, 12, 13)，2.77 (2H, t, J = 6.1 Hz, H-11)，2.34 (2H, t, J = 7.4 Hz, H-2)，2.05 (4H, m, H-8, 14)，1.63 (2H, m, H-3)，1.31 (14H, brs, H-4~7, H-15~17)，0.89 (3H, t, J = 6.7 Hz, H-18)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C：14.0 (C-18, CH₃)，22.6 (CH₂)，24.6 (CH₂)，25.6 (CH₂)，27.1 (CH₂)，27.2 (CH₂)，29.0 (CH₂)，29.0 (CH₂)，29.1 (CH₂)，29.3(CH₂)，29.6 (CH₂)，31.5 (CH₂)，34.1 (CH₂)，127.8 (CH)，128.0 (CH)，129.9 (CH)，130.1 (CH)，180.6 (C = 0)。该化合物为不饱和脂肪酸。

Hexadecanoic acid (2)：无色针状结晶，C₁₆H₃₂O₂∙¹H NMR ( CDCl₃, 400 MHz) δ_H：2. 34 (2H, t, J = 7. 5 Hz, H₂-2)，1.62 ( 2H, brt, J = 7. 3 Hz, H₂-3)，1.30~1.25 (24H, brs, 12 × -CH₂)，0.88 (3H, t, J = 6. 5 Hz, Me-16)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ_C：180.4 (C-1)，34.1 (C-2)，24.9 (C-3)，29.7~29.0 (10 × -CH₂)，31.9 (C-14)，22.7 (C-15)，14.1 (C-16)。由波谱数据推出该化合物为不饱和脂肪酸。

Senkirkine (3)：无色油状，C₁₉H₂₇NO₆∙¹H NMR (CDCl₃, 400 Hz)：δ_H 6.09 (1H, t, J = 2.3 Hz, H-2)，3.32 (1H, br d, J = 18, H-3a)，3.16 (1H, ddd, J = 18, 2.6, 2.3 Hz, H-3b)，2.76 (1H, ddd, J = 12.7, 5.7, 4.2 Hz, H-5a)，2.65 (1H, ddd, J = 12.7, 12.0, 4.2 Hz, H-5b)，2.46 (1H, dddd, J = 11.4, 12.0, 5.7, 3.2 Hz, H-6a)，2.28(1H, dq, J = 14.4, 4.2 Hz, H-6b)，4.92 (1H, dd, J = 4.4, 3.2 Hz, H-7)，5.32 (1H, d, J = 11.4, Hz, H-9a)，4.38 (1H, br d, J = 11.4, H-9b)，1.76 (1H, ddq, J = 11.0, 2.5, 7.1 Hz, H-13)，2.12 (1H, dd, J = 14.0, 11.0 Hz, H-14a)，1.27 (s, H-18)，0.84 (3H, d, J = 7.1, H-19)，6.54 (1H, t, J = 6.8, H-20)，4.71 (lH, dd, J = 14.5, 6.8 Hz, Ha-2l)，4.60 (lH, dd, J = 14.5, 6.8 Hz, Hb-2l)，2.04 (3H, s, H-22)；¹³C NMR (CDCl₃, 100 MHz) δ_C：134.5 (s, C-1)，137.0 (d, C-2)，58.9 (t, C-3)，53.5 (t, C-5)，36.2 (t, C-6)，78.0 (d, C-7)，64.0 (t, C-9)，178.0 (s, C-11)，76.6 (s, C-12)，38.5 (t, C-13)，37.6(t, C-14)，134.3 (s, C-15)，166.4 (s, C-16)，24.5 (q, C-18)，10.9 (q, C-19)，137.0 (d, C-20)，58.9 (t, C-21)，40.6 (q, C-22)。由波谱数据推出，该化合物为吡咯烷生物碱。

(-)-cryptomerion (4)：无色油状，C₁₅H₂₂O，ESI-MS m/z 218 [M]+；1H NMR(600 MHz, CDCl₃) δ_H：6.75 (1H, m, H-3)，2.59 (1H, ddd, J = 1.5, 3.7, 15.9 Hz, Ha-4)，2.35 (1H, dd, J = 13.2, 15.9 Hz, Ha-4)，2.69 (1H, ddd, J = 4.0, 10.2, 13.6 Hz, H-5)，2.46 (1H, dtm, J = 4.4, 18.3 Hz, Ha-6)，2.27 (1H, ddm, J = 11.0, 18.3 Hz, Hb-6)，2.05 (2H, m, H-8)，2.11 (2H, m , H-9)，5.09 (1H, tq, J = 1.5, 6.8 Hz, H-10)，1.61 (3H, s, H3-12)，1.68 (3H, d, J = 1.0 Hz H3-13)，4.85 (1H, s, Ha-14)，4.82 (1H, s, Hb-14)，1.79 (3H, dt, J = 1.4, 2.4 Hz, H3-15)；¹³C NMR (150 MHz, CDCl₃) δ_C：199.8 (s, C-1)，135.3 (s, C-2)，144.6 (d, C-3)，31.4 (t, C-4)，41.1 (d, C-5)，43.5 (t, C-6)，150.7 (s, C-7)，34.2 (t, C-8)，26.6 (t, C-9)，123.7 (d, C-10)，131.9 (s, C-11)，25.6 (q, C-12)，17.7 (q, C-13)，109.1 (t, C-14)，15.7 (q, C-15)。

2,2-dimethyl-6-acetylhromanone (5)：无色油状，C₁₃H₁₄O₃，ESI-MS m/z 218 [M]+；1H NMR (400 MHz, methanol-d4) δ_H：1.49 (6H, s, CH₃ × 2)，2.59 (3H, s, -COCH₃)，2.77 (2H, s, H-2)，7.00 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-8)，8.13 (1H, dd, J = 8.8, 2.2 Hz, H-7)，8.45(1H, d, J = 2.2 Hz, H-5)；¹³C NMR (100 MHz, methanol-d4) δ_C：80.3 (s, C-1)，48.5 (t, C-2)，191.7 (s, C-3)，130.2 (s, C-4)，135.4 (d, C-5)，119.1 (d, C-6)，128.1 (d, C-7)，119.0(d, C-8)，163.4 (s, C-9)，26.6 (CH₃ × 2)，26.4 (-COCH₃)，196.3 (-COCH₃)。

β-oploplenone (6)：无色油状；C₁₅H₂₄O，ESI-MS m/z 220 [M]+；1H NMR (400 MHz, methanol-d4) δ_H：1.34 (2H, m, H-1)，1.62 (1H, dtd, J = 20.0, 7.4, 12.8 Hz, H-2a)，1.81 (1H, m, H-2b)，1.77 (1H, m, H-3)，1.25 (1H, m, H-4)，1.34 (1H, m, H-5)，1.10 (1H, dq, J = 4.4, 13.0 Hz, H-6a)，1.75 (1H, m, H-6b)，1.95 (1H, m, H-7a)，2.35 (1H, ddd, J = 2.4, 4.3, 13.4 Hz, H-7b)，1.83 (1H, m, H-9)，4.54 (1H, q, J = 1.7 Hz, H-10a)，4.62 (1H, q, J = 1.7, H-10b)，1.95 (1H, m, H-11)，0.95 (3H, d, J = 6.9 Hz, H3-12)，0.78 (3H, d, J = 6.9 Hz, H3-13)，1.18 (3H, q, H3-15)；¹³C NMR (100 MHz, methanol-d4) δ_C：28.5 (t, C-1)，27.7 (t, C-2)，50.4 (d, C-3)，52.9 (d, C-4)，53.5 (d, C-5)，29.7 (t, C-6)，36.3 (t, C-7)，152.2 (s, C-8)，56.8 (d, C-9)，103.9 (t, C-10)，30.9 (d, C-11)，22.3 (q, C-12)，16.1 (q, C-13)，214.7 (s, C-14)，29.7 (q, C-15)。

7β-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-14-hydroxy-notonipetranone (7)：无色油状；C₂₆H₄₆O₆，ESI-MS m/z 448 [M]+；1H NMR (400 MHz, methanol-d4) δ_H：5.46 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-1β)，5.54 (1H, br s H-7α)，4.78 (1H, s, Ha-10)，5.18 (1H, s, Hb-10)，2.37 (1H, m, H-11)，1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, H3-12)，0.82 (3H, t, J = 7.0 Hz, H3-13)，1.23 (3H, d, J = 6.6 Hz, H3-15)，5.61 (1H, s, H-2')，2.16 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-4')，1.07 (3H, t, J = 7.3 Hz, H3-5')，2.10 (3H, s, H3-6')，2.37 (1H, m, H-2'')，0.89 (3H, t, J = 7.5 Hz, H3-4'')，1.15 (3H, d, J = 6.6 Hz, H3-5'')；¹³C NMR(100 MHz, methanol-d4) δ_C：73.2 (d, C-1)，206.2 (s, C-2)，60.4 (d, C-3)，47.3 (d, C-4)，45.2 (d, C-5)，30.2 (t, C-6)，74.2 (d, C-7)，142.6 (s, C-8)，41.7 (d, C-9)，113.0 (t, C-10)，28.8 (d, C-11)，21.7 (q, C-12)，17.0 (q, C-13)，68.5 (d, C-14)，15.7 (q, C-15)，175.3 (s, C-1')，115.4 (d, C-2')，162.3 (s, C-3')，34.1 (t, C-4')，12.2 (q, C-5')，17.0 (q, C-6')，165.8 (s, C-1'')，45.2 (d, C-2'')，27.3 (t, C-3'')，11.8(q, C-4'')，17.0 (q, C-5'')。

14-acetoxy-7β-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-1α-(2-methylbutyryloxy)-notonipetranone (8)：无色油状；C₂₈H₄₂O₇，ESI-MSm/z 490 [M]+；1H NMR (400 MHz, methanol-d4) δ_H：5.46 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-1β)，5.54 (1H, br s H-7α)，4.78 (1H, s, Ha-10)，5.18 (1H, s, Hb-10)，2.37 (1H, m, H-11)，1.00 (3H, d, J = 6.6 Hz, H3-12)，0.82 (3H, t, J = 7.0 Hz, H3-13)，1.23 (3H, d, J = 6.6 Hz, H3-15)，5.61 (1H, s, H-2')，2.16 (1H, d, J = 7.7 Hz, H-4')，1.07 (3H, t, J = 7.3 Hz, H3-5')，2.10 (3H, s, H3-6')，2.37 (1H, m, H-2'')，0.89 (3H, t, J = 7.5 Hz, H3-4'')，1.15 (3H, d, J = 6.6 Hz, H3-5'')；¹³C NMR(100 MHz, methanol-d4) δ_C：74.0 (d, C-1)，209.8 (s, C-2)，57.5 (d, C-3)，47.4 (d, C-4)，45.2 (d, C-5)，30.3 (t, C-6)，75.0 (d, C-7)，142.7 (s, C-8)，42.5 (d, C-9)，113.7 (t, C-10)，28.7 (d, C-11)，21.8 (q, C-12)，17.3 (q, C-13)，70.7 (d, C-14)，15.7 (q, C-15)，172.4 (s, C-1')，115.5 (d, C-2')，163.6 (s, C-3')，34.6 (t, C-4')，12.0 (q, C-5')，17.3 (q, C-6')，176.6 (s, C-1'')，45.5 (d, C-2'')，27.8 (t, C-3'')，12.4(q, C-4'')，16.3 (q, C-5'')。

tussilagone (9)：无色结晶；C₂₃H₃₄O₅，ESI-MS m/z 390 [M]+；1H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H：2.15 (1H, dd, J = 16.9, 13.9 Hz, H-1α)，2.40 (1H, ddd, J = 16.9, 1.0, 5.5 Hz, H-1β)，2.50 (1H, dd, J = 3.0, 11.0 Hz, H-3)，1.47 (1H, m, H-4)，1.97 (1H, dddd, J = 2.0, 2.0, 11.0, 14.0 Hz, H-5)，1.45 (1H, ddd, J = 2.0, 11.0, 14.0 Hz, H-6α)，2.08 (1H, dt, J = 2.0, 14.0 Hz, H-6β)，5.58 (1H, t, J = 3.0 Hz, H-7)，2.60 (1H, ddddd, J = 2.0, 2.0, 5.9 11.5, 13.9 Hz, H-9)，5.15 (1H, s-like, H-10Z)，4.79 (1H, d, J = 1.0 Hz, H-10E)，2.30 (1H, dqq, J = 3.0, 6.8, 6.9 Hz, H-11)，0.99 (3H, d, J = 6.5 Hz, H3-12)，0.78 (3H, d, J = 7.0 Hz, H3-13)，5.10 (1H, dq, J = 3.2, 6.6 Hz, H-14)，1.22 (3H, d, J = 6.5 Hz, H3-15)，5.63 (1H, qt, J = 1.3, 1.3 Hz, H-2')，2.17 (2H, dq, J = 1.3, 7.5 Hz, H-4')，1.07 (3H, t, J = 7.5 Hz, H3-5')，2.15 (3H, d, J = 1.3 Hz, H3-6')，2.15 (3H, s, OCOCH₃)；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C：42.5 (t, C-1)，214.9 (s, C-2)，57.2 (d, C-3)，49.0 (d, C-4)，43.8 (d, C-5)，31.1 (t, C-6)，72.9 (d, C-7)，146.0(s, C-8)，42.2 (d, C-9)，110.1 (t, C-10)，27.5 (d, C-11)，21.5(q, C-12)，15.4 (q, C-13)，69.5 (d, C-14)，15.3 (q, C-15)，165.9 (s, C-1')，114.5 (d, C-2')，162.0 (s, C-3')，33.8 (t, C-4')，11.9 (q, C-5')，18.9 (q, C-6')，170.9 (OCOCH₃)，21.3 (OCOCH₃)。

7β-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-1α-(2-methylbutyryloxy)-3(14)-dehydro-Z-notonipetrane (10)：无色油状；C26H38O5，ESI-MS m/z 430 [M]+；1H NMR (500 MHz, methanol-d4) δ_H：5.56 (1H, d, J = 4.0 Hz, H-1β)，(1H, d, J = 3.3 Hz, H-7α)，4.82 (1H, s, Ha-10)，5.18 (1H, s, Hb-10)，2.02 (1H, m, H-11)，0.98 (3H, d, J = 6.6 Hz, H3-12)，0.90(3H, t, J = 7.0 Hz, H3-13)，6.42 (1H, q, J = 7.3 Hz, H-14)，2.18 (3H, d, J = 7.3 Hz, H3-15)，5.64 (1H, s, H-2')，1.07 (3H, t, J = 7.3 Hz, H3-5')，2.15 (3H, s, H3-6')，2.40 (1H, m, H-2'')，0.87 (3H, t, J = 7.3 Hz, H3-4'')，1.13 (3H, d, J = 7.0 Hz, H3-5'')；¹³C NMR(125 MHz, methanol-d4) δ_C：73.2 (d, C-1)，200.1 (s, C-2)，139.0 (s, C-3)，44.6 (d, C-4)，40.3 (d, C-5)，29.6 (t, C-6)，72.3(d, C-7)，140.4 (s, C-8)，45.7 (d, C-9)，112.5 (t, C-10)，27.3 (d, C-11)，21.2 (q, C-12)，15.0 (q, C-13)，136.7 (d, C-14)，15.5 (q, C-15)，165.8 (s, C-1')，114.4 (d, C-2')，162.0 (s, C-3')，33.7 (t, C-4')，11.4 (q, C-5')，18.8 (q, C-6')，175.4 (s, C-1'')，40.8 (d, C-2'')，26.7 (t, C-3'')，11.8 (q, C-4'')，16.5 (q, C-5'')。

(1R,3R,4R,5S,6S)-1,5-diacetoxy-8-angeloyloxy-3,4-epoxybisabola-7(14),10-dien-2-one (11)：无色油状；C24H32O8，ESI-MS m/z 448 [M]+；1H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H：5.68 (1H, d, J = 12.7 Hz, H-1)，3.40 (1H, s, H-4)，5.35 (1H, d, J = 8.8 Hz, H-5)，2.87 (1H, d, J = 8.8, 12.7 Hz, H-6)，5.23 (1H, dd, J = 3.2, 7.1 Hz, H-8)，2.33 (2H, m, H-9)，5.04 (1H, tq, J = 1.0, 7.3 Hz, H-10)，1.68 (3H, d, J = 1.0Hz, H3-12)，1.62 (3H, s, H3-13)，5.24 (1H, s, Ha-14)，5.33 (1H, d, J = 0.7Hz, Hb-14)，1.48 (3H, s, H3-15)，6.08 (1H, qq J = 1.5, 7.1 Hz, H-3')，1.97 (3H, dq, J = 1.5, 7.1 Hz, H-4')，1.88 (3H, dq, J = 1.5, 1.5 Hz, H3-5')；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C：72.3 (d, C-1)，199.1 (s, C-2), 61.0 (d, C-3)，65.4 (d, C-4)，74.5 (d, C-5)，48.1 (d, C-6)，145.7 (s, C-7)，75.6 (d, C-8)，31.5 (t, C-9)，119.3 (d, C-10)，134.0 (s, C-11)，24.4 (q, C-12)，18.7 (q, C-13)，113.3 (t, C-14)，14.6 (q, C-15)，166.4 (s, C-1')，127.5 (s, C-2')，138.1 (d, C-3')，16.6 (q, C-4')，19.5 (q, C-5')，19.3 (1-COCH₃)，169.5 (1-COCH₃)，19.2 (5-COCH₃)，170.1 (5-COCH₃)。

通过波谱数据推出，化合物6、7、8、9、10和11为oplopane型倍半萜，属于款冬花中一类较为常见的倍半萜。

(1R,3R,4R,5S,6S)-1-acetoxy-8-angeloyloxy-3,4-epoxy-5-hydroxybisabola-7(14),10-dien-2-one (12)：无色油状；C₂₂H₃₀O₇，ESI-MS m/z 406 [M]+；1H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ_H：5.68 (1H, d, J = 13.7 Hz, H-1)，3.51 (1H, s, H-4)，4.25 (1H, d, J = 8.5 Hz, H-5)，2.56 (1H, d, J = 8.5, 13.7 Hz, H-6)，4.72 (1H, dd, J = 2.7, 8.8 Hz, H-8)，2.18 (1H, m, Ha-9)，2.52 (1H, m , Hb-9)，5.13 (1H, tq, J = 1.0, 7.1 Hz, H-10)，1.70 (3H, d, J = 1.0 Hz, H3-12)，1.64 (3H, s, H3-13)，5.08 (1H, s, Ha-14)，5.20 (1H, d, J = 0.7 Hz, Hb-14)，1.48 (3H, s, H3-15)，6.20 (1H, qq J = 1.5, 7.3 Hz, H-3')，2.00 (3H, dq, J = 1.5, 7.3 Hz, H-4')，1.92 (3H, dq, J = 1.5, 1.5 Hz, H3-5')；¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ_C：72.2 (d, C-1)，201.9 (s, C-2)，62.5 (d, C-3)，70.2 (d, C-4)，73.8 (d, C-5)，54.5 (d, C-6)，148.3 (s, C-7)，76.8 (d, C-8)，33.3 (t, C-9)，120.6 (d, C-10)，135.4 (s, C-11)，26.0 (q, C-12)，18.1 (q, C-13)，114.3 (t, C-14)，14.7 (q, C-15)，168.4 (s, C-1')，129.1 (s, C-2')，140.0 (d, C-3')，16.0 (q, C-4')，20.3 (q, C-5')，20.7 (1-COCH₃)，171.4 (1-COCH₃)。

1β,8-bisangeloyloxy-3α,4α-epoxybisabola-7(14),10-dien-2-one (13)：无色油状；C₂₅H₃₄O₆，ESI-MS m/z 430 [M]+；1H NMR (600 MHz, methanol-d4) δ_H：5.74 (1H, d, J = 12.8 Hz, H-1)，3.40 (1H, br d, J = 4.4 Hz, H-4)，2.21 (2H, brddd, J = 4.4, 8.0, 15.0 Hz, H-5)，2.78 (1H, ddd, J = 8.0, 11.6, 12.8 Hz, H-6)，5.07 (1H, dd, J = 6.0, 8.0 Hz, H-8)，2.35 (2H, m, H-9)，5.03 (1H, t, J = 6.3 Hz, H-10)，1.64 (3H, brs, H3-12)，1.58 (3H, brs, H3-13)，5.24 (1H, s, Ha-14)，5.09 (1H, s, Hb-14)，1.42 (3H, s, H3-15)，6.05 (1H, qq J = 1.2, 7.2 Hz, H-3')，1.95 (3H, dd J = 1.2, 7.2 Hz, H-4')，1.86 (3H, d, J = 1.2 Hz, H3-5')，5.60 (1H, d J = 1.2 Hz, H-2'')，2.12 (2H, br q, J = 7.4 Hz, H-4'')，1.01 (3H, t, J = 7.4 Hz, H3-5'')，2.09 (3H, br s, H-6'')；¹³C NMR (150 MHz, methanol-d4) δ_C：75.6 (d, C-1)，203.4 (s, C-2)，62.8 (d, C-3)，65.8 (d, C-4)，33.4 (t, C-5)，45.5 (d, C-6)，149.4 (s, C-7)，76.6 (d, C-8)，32.9 (t, C-9)，120.6 (d, C-10)，135.6 (s, C-11)，26.1 (q, C-12)，18.3 (q, C-13)，114.7 (t, C-14)，15.2 (q, C-15)，168.3 (s, C-1')，129.3 (s, C-2')，139.7 (d, C-3')，16.2 (q, C-4')，21.3 (q, C-5')，167.0 (s, C-2'')，114.3 (d, C-2'')，164.7 (s, C-3'')，32.9 (t, C-4'')，12.4 (q, C-5'')，19.1 (q, C-6'')。

1β-(3-ethyl-cis-crotonoyloxy)-8-angeloyloxy-3α,4α-epoxy-bisabola-7(14),10-dien-2-one (14)：无色油状；C25H34O6，ESI-MS m/z 430 [M]+；1H NMR (400 MHz, methanol-d4) δ_H：5.74 (1H, d, J = 12.8 Hz, H-1)，3.40 (1H, br d, J = 4.4 Hz, H-4)，2.21 (2H, brddd, J = 4.4, 8.0, 15.0 Hz, H-5)，2.78 (1H, ddd, J = 8.0, 11.6, 12.8 Hz, H-6)，5.07 (1H, dd, J = 6.0, 8.0 Hz, H-8)，2.35 (2H, m, H-9)，5.03 (1H, t, J = 6.3 Hz, H-10)，1.64 (3H, brs, H3-12)，1.58 (3H, brs, H3-13)，5.24 (1H, s, Ha-14)，5.09 (1H, s, Hb-14)，1.42 (3H, s, H3-15)，6.05 (1H, qq J = 1.2, 7.2 Hz, H-3')，1.95 (3H, dd J = 1.2, 7.2 Hz, H-4')，1.86 (3H, d, J = 1.2 Hz, H3-5')，5.60 (1H, d J = 1.2 Hz, H-2'')，2.12 (2H, br q, J = 7.4 Hz, H-4'')，1.01 (3H, t, J = 7.4 Hz, H3-5'')；¹³C NMR (100 MHz, methanol-d4) δ_C：75.4 (d, C-1)，202.9 (s, C-2)，62.7 (d, C-3)，65.7 (d, C-4)，33.6 (t, C-5)，46.5 (d, C-6)，149.3 (s, C-7)，75.6 (d, C-8)，32.1 (t, C-9)，120.5 (d, C-10)，135.5 (s, C-11)，26.0 (q, C-12)，18.1 (q, C-13)，113.5 (t, C-14)，15.1 (q, C-15)，168.1 (s, C-1')，128.6 (s, C-2')，139.3 (d, C-3')，16.1 (q, C-4')，20.7 (q, C-5')，168.2 (s, C-2'')，129.0 (s, C-2'')，139.5 (d, C-3'')，16.1 (q, C-4'')，20.8 (q, C-5'')。

(4R,6E)-2-acetoxy-8-angeloyloxy-4-hydroxybisabola-2,6,10-trien-1-one (15)：无色油状；C22H30O6，ESI-MS m/z 390 [M]+；1H NMR (600 MHz, methanol-d4) δ_H：3.99 (1H, ddd, J = 8.1, 3.7, 3.7 Hz, H-5)，2.52 (1H, brddd, J = 14.7, 3.7 Hz, H-6α)，2.96 (1H, dd, J = 14.7, 3.7 Hz, H-6β)，5.54 (1H, t, J = 7.3 Hz, H-8)，2.12 (2H, m, H-9)，4.96 (1H, br t, J = 6.3 Hz, H-10)，1.54 (3H, s, H3-12)，1.44 (3H, s, H3-13)，1.81 (3H, s, H3-14)，2.11(3H, d, J = 1.8 Hz, H3-15)，5.63 (1H, qq J = 7.0, 1.5 Hz, H-3')，1.82 (1H, dq, J = 7.0, 1.5 Hz, H-4')，1.71 (3H, dq, J = 1.5, 1.5 Hz, H3-5')，1.89 (3H, s, OCOCH₃)；¹³C NMR (150 MHz, methanol-d4) δ_C：184.8 (s, C-1)，146.9 (s, C-2)，149.6 (s, C-3)，69.4 (d, C-4)，37.9 (t, C-5)，128.9 (s, C-6)，144.6 (s, C-7)，75.0 (d, C-8)，32.7 (t, C-9)，119.7 (d, C-10)，137.0 (s, C-11)，26.2 (q, C-12)，18.1 (q, C-13)，15.6 (q, C-14)，14.1 (q, C-15)，168.6 (s, C-1')，128.9 (s, C-2')，140.1 (d, C-3')，16.2 (q, C-4')，20.3 (q, C-5')，20.9 (1-COCH₃) 170.4 (1-COCH₃)。

通过波谱数据得出，化合物12、13、14和15均为没药烷型倍半萜。

5. 结果与讨论

在对款冬花中化学成分的研究中，发现其含有吡咯烷生物碱 [16]、倍半萜 [17]、酚类化合物 [18]、黄酮 [19] 等化学成分，不管是国外学者，还是国内学者对其成分研究最多的是生物碱、酚类化合物和黄酮。对于款冬花中所含的倍半萜化合物还要追溯于 20 世纪 90 年代末由Yaoita Y等分离得到新的没药烷型倍半萜 [9] [14]，近年来，也有学者从款冬花植物中发现了两个新颖结构的oplopane型倍半萜7β-angeloyloxy-14-hydroxy-notonipetranone和1α-hydroxy-7β-(4-methylsenecioyloxy)-oplopa-3(14)Z,8(10)-dien-2-one，一个新颖结构的没药烷型倍半萜1α-(3″-ethyl-cis-crotonoyloxy)-8-angeloyloxy-3β,4β-epoxy-bisabola-7(14),10-diene [3]。本文中共分离得到20个化合物，运用各种波谱手段鉴定得到15个化合物，其中化合物1和2为脂肪酸，化合物3为吡咯烷生物碱，化合物6、7、8、9、10和11为oplopane型倍半萜，化合物12、13、14和15均没药烷型倍半萜。

款冬花中报道的倍半萜具有广泛的活性，包括抗炎、抗过敏、抗癌、神经保护等。本文通过鉴定化学结构，探讨结构特征，从结构特征上看，款冬花中主要以oplopane型倍半萜和没药烷型倍半萜为主，其他骨架类型的倍半萜相对较少。而且，这些结构的化学活性相对较低。此外，有文献报道的款冬花中抗炎活性的结果与构效关系有一定关系。因此，我们下一步将对已分离得到的化合物进行抗炎活性的筛选，从而发现其抗炎活性与结构之间的关系。

基金项目

“科技+”行动计划——医学研究项目(2019114613YX001SF044 (16))。

NOTES

^*通讯作者。