1. 引言
皮肤角质层的一个重要功能是潴留适量的水分，以维持皮肤的正常生理功能(皮肤弹性、皮肤层中的酶活性)，皮肤含水量下降，往往是生理性老化的象征，皮肤干燥同时也是某些皮肤病的表现。在干燥环境中，皮肤角质层水分含量减少，角质形成细胞DNA的合成速度明显加快，加重由于表皮通透屏障功能破坏所致的表皮增厚，表皮分化蛋白减少，白介素(IL)-1α增多，真皮的组胺和肥大细胞增多等等 [1] 。因此，调节保持角质层相应含水量、保湿，对于延缓皮肤老化、维持皮肤健康、滋润美容皮肤、防治某些皮肤病都具有重要的意义 [2] [3] [4] [5] 。
Corneometer仪器电容测试法，针对皮肤角质层的水分含量进行定量化，能够灵敏地反应皮肤水分含量的变化，且重现性好，是目前保湿化妆品功效评价常用的方法之一 [6] 。本研究采用Corneometer仪器电容测试法，对哈本即雾高透水光仪联合哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液使用对皮肤角质层水分含量的影响进行研究，观察研究该产品与护肤品的联合促渗作用和保湿作用。
2. 材料
2.1. 主要仪器
CM825皮肤水分测试仪(Courage + Khazaka electronic GmbH)，ME204电子天平(梅特勒)。
2.2. 样品
哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液，由佛山市哈本科技有限公司生产(2211003882-1, 2211003663-1)；哈本即雾高透水光仪，由佛山市哈本科技有限公司生产(2211002019-1)。
3. 方法
3.1.检测方法
选择前臂内侧皮肤角质层水分含量基础值在15~45 (Corneometer Unit, C.U.)之间的中国健康男性/女性受试者25名，年龄范围为18~65岁。采用自身前后对照，平行空白对照的方法，测量受试者皮肤角质层水分含量。
3.2. 检测依据
参照《QB/T 4256-2011化妆品保湿功效评价指南》进行测试。
3.3. 检测指标
皮肤角质层水分含量。
3.4. 检测环境
本次测试的环境温度21.0℃~22.0℃，相对湿度41%RH~51%RH。
3.5. 检测流程 [7] [8] [9] [10]
1) 受试者统一清洁双手前臂内侧，清洁方法为用干的面巾纸擦拭干净，在温度21℃ ± 1℃，湿度50% ± 10% RH的实验室中静坐至少20 min，期间不能喝水和饮料，前臂暴露，保持放松。
2) 选取双手前臂内侧4个区域，每个区域面积为3 cm × 3 cm，同一手臂可同时标记多个区域，间隔至少1 cm以上。
3) 测试受试者手臂各区域皮肤角质层水分含量基础值。
4) 标记产品区和对照区，产品涂抹区和空白对照区应随机分布于左右手臂标定区域，确保所有产品和空白区域位置在统计学上达到平衡，初始水分含量值无显著性差异。
5) 根据产品使用要求在产品区使用测试样品，随机选择划定区域定义为区域1、区域2、区域3、区域4；区域1作为雾化仪低档位使用的测试区域，区域2作为雾化仪高档位使用的测试区域，区域3作为空白对照区域，区域4作为使用精华液的测试区域。区域1和区域2分别使用不同档位，分别使用15秒、7秒，距离皮肤3 cm高处使用。
6) 对照区为空白区，不使用产品。
7) 在1小时、2小时、3小时、4小时后再次测试受试者手臂各区域皮肤角质层水分含量数值。
3.6. 数据处理与统计学分析 [11] [12]
采用SPSS 19.0统计软件分析数据，计量资料以(
)表示，多组间比较，当资料满足正态分布且组间方差齐时，应用单因素方差分析；如不满足上述条件则采用非参数检验(秩和检验)，检验水准为α = 0.05。
变化率计算公式如下：
公式中，n = 1，2，3，4，T0 (受试区使用试验产品前，皮肤参数基础值)；T1h (受试区使用试验产品后1小时的皮肤参数数值)；T2h (受试区使用试验产品后2小时的皮肤参数数值)，以此类推。
3.7. 安全性评价
受试者按要求使用试验产品后，通过询问、检查，并记录受试者测试期间有无皮肤反应或全身性不良反应，包括不良事件的表现、发生时间、处理措施及转归，并对不良事件与所使用样品的关系做出判断。
4. 实验结果
4.1. 受试者情况
入组25名受试者，其中编号为VT010的受试者因个人原因退出测试，最终统计24名受试者，男性8名，女性16名，年龄22至57岁，平均年龄40.58 ± 1.85岁。
4.2. 皮肤角质层水分含量检测结果
皮肤角质层水分含量检测结果详见下表1及图1~5。结果显示，空白对照区域1、2、3小时后，皮肤角质层水分含量与基础值相比无显著性变化(p ≥ 0.05)，4小时后显著下降(0.01 ≤ p < 0.05)。使用产品1、2、3、4小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域皮肤角质层水分含量与基础值相比均有显著性上升(p < 0.001)。受试者单次使用试验产品后1、2、3、4小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档、低档区域皮肤角质层水分含量与基础值相比均有显著性上升(p < 0.001)。
4.3. 皮肤角质层水分含量改善率
皮肤角质层水分含量改善率结果详见下表2。空白区域空白对照区域皮肤角质层水分含量与基础值相比下降，尤其4小时后，下降明显，下降率为2.44%。使用1、2、3、4小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液组、哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档、哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档与基础值均有上升，尤其哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档上升明显，4小时后改善率仍有92.7%。
Table 1. Results of moisture content in skin cuticle (n = 24,
)
表1. 皮肤角质层水分含量检测结果(n = 24,
)
注：1. 各组与自身基础值相比，“*”表示0.01 ≤ p < 0.05；“**”表示0.001 ≤ p < 0.01；“***”表示p < 0.001。
Figure 1. Results of moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence)
图1. 皮肤角质层水分含量结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液)
Figure 2. Results of moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence + high-end area of Haben aqua Atomization skincare Pro)
图2. 皮肤角质层水分含量结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透档水光仪高档)
注：“n.s”表示无统计学差异；“*”表示0.01 ≤ p < 0.05；“**”表示0.001 ≤ p < 0.01；“***”表示p < 0.001)
Figure 3. Results of moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence + low-end area of Haben aqua Atomization skincare Pro)
图3. 皮肤角质层水分含量结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透档水光仪低档)
Figure 4. Results of moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence+high-end area of Haben aqua Atomization skincare Pro vs. Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence)
图4. 皮肤角质层水分含量结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档vs.哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液)
4.4. 皮肤角质层水分含量改变值
皮肤角质层水分含量改善值检测结果详见下表3及图6~10。结果显示，受试者单次使用试验产品后1、2、3、4小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域、哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档区域、哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档区域的皮肤角质层水分含量改变值与空白对照区域相比均有显著性上升(p < 0.001)。受试者单次使用试验产品后1、3、4小时，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档区域的皮肤角质层水分含量改变值与哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域相比有显著性上升(0.01 ≤ p < 0.05)；2小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档区域的皮肤角质层水分含量改变值与哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域相比有显著性上升(0.001 ≤ p < 0.01)；受试者单次使用试验产品后1、2小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档区域的皮肤角质层水分含量改变值与哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域相比有显著性上升(p < 0.001)。3、4小时后，同样显著上升(0.01 ≤ p < 0.05)、(0.001 ≤ p < 0.01)。
注：“n.s”表示无统计学差异；“*”表示0.01 ≤ p < 0.05；“**”表示0.001 ≤ p < 0.01；“***”表示p < 0.001)
Figure 5. Results of moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence + low-end area of Haben aqua Atomization skincare Pro vs. Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence)
图5. 皮肤角质层水分含量结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档vs.哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液)
Table 2. Improvement rate of skin cuticle moisture content
表2. 皮肤角质层水分含量改善率
Table 3. Results of changes in moisture content of skin cuticle (n = 24,
)
表3. 皮肤角质层水分含量改变值检测结果(n = 24,
)
注：1. 与空白对照组相比，“*”表示0.01 ≤ p < 0.05；“**”表示0.001 ≤ p < 0.01；“***”表示p < 0.001。
2. 与哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液组相比，“Δ”表示0.01 ≤ p < 0.05；“△△”表示0.001 ≤ p < 0.01；“△△△”表示p < 0.001。
Figure 6. Results of changes in moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence)
图6. 皮肤角质层水分含量改变值结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液)
Figure 7. Results of changes in moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence + high-end area of Haben aqua Atomization skincare Pro)
图7. 皮肤角质层水分含量改变值结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档)
4.5. 安全性评价
24名受试者在整个试验过程中未见任何皮肤不良反应，详见表4。
5. 讨论
哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液由透明质酸钠、二裂酵母发酵产物滤液、依克多因、水解透明质酸钠、丁二醇、甘油、聚谷氨酸钠、β-葡聚糖等精制而成。透明质酸(Hyaluronic Acid, HA)是一种由N-乙酰氨基葡萄糖和D-葡萄糖醛酸重复链接而成的高分子黏多糖，透明质酸与硫酸化黏多糖以及胶原蛋白、弹性蛋白等纤维状蛋白质，共同组成含有大量水分的细胞外胶状基质 [13] ，是构成皮肤基质的重要成分之一。有研究表明，皮肤干燥、粗糙、皱纹、失去弹性和润泽感等老化表现与有HA有关，青少年时期(10~20岁)女性皮肤透明质酸含量最高，成年后随着年龄增长，如果将人20岁时体内HA的相对含量定为100%，到30岁、50岁和60岁时则分别下降为65 %、45%和25% [14] 。透明质酸含量逐渐减少，皮肤角质层水
注：“n.s”表示无统计学差异；“*”表示0.01 ≤ p < 0.05；“**”表示0.001 ≤ p < 0.01；“***”表示p < 0.001)
Figure 8. Results of changes in moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence + low-end area of Haben aqua Atomization skincare Pro)
图8. 皮肤角质层水分含量改变值结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档)
Figure 9. Results of changes in moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence + low-end area of Haben aqua Atomization skincare Pro vs. Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence)
图9. 皮肤角质层水分含量改变值结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档vs.哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液)
分含量呈现同样的趋势，青少年时期10~20岁女性皮肤透明质酸含量最高，成年后随着年龄增长，透明质酸含量逐渐减少，皮肤角质层含水量在青少年时期10~20岁最高，以后也随着年龄增长逐渐降低，相应年龄组皮肤HA含量与角质层含水量呈正相关 [15] 。外用透明质酸可通过水合作用，改变皮肤角质层结构以及细胞表面受体(如CD44)介导的主动运输，促进表皮细胞增殖，刺激真皮层中的成纤维细胞形成胶原，改善皮肤弹性、减少皱纹。
注：“n.s”表示无统计学差异；“*”表示0.01 ≤ p < 0.05；“**”表示0.001 ≤ p < 0.01；“***”表示p < 0.001)
Figure 10. Results of changes in moisture content of skin cuticle (Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence + high-end area of Haben aqua Atomization skincare Pro vs. Haben Sodium Hyaluronate Moisturizing and Soothing essence)
图10. 皮肤角质层水分含量改变值结果(哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档vs.哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液)
Table 4. Skin reactions in human suitability tests
表4. 人体适用试验皮肤反应
除透明质酸外，皮肤微生态平衡的维持也是保持皮肤健康的基础，与皮肤微生态有关的化妆品原料主要包含益生菌、益生元、后生元、益生素等，二裂酵母发酵产物滤液属益生素，已经录入《已使用化妆品原料名称目录》(2021版) [16] ，其发酵菌株为双歧杆菌，尤其多以长双歧杆菌居多，它的发酵过程中会产生多种代谢产物，包括多糖、有机酸、氨基酸、多肽、蛋白质、核苷酸和维生素等，这些成份可以为人体肌肤提供多种营养，对皮肤都具有良好的生物作用 [17] 。依克多因是一种广泛存在于嗜盐菌和链球菌等非嗜盐菌中的环状氨基酸衍生物，分子结构中含有较多羧基和环状氨基，分子表面电荷分布密集，形成强烈的静电势，可以吸附水分子，通过氢键与水结合，形成稳定的水结合物，与HA联合使用具有长效保湿、协同增效等作用，可共同抵抗光损伤导致的皮肤干燥 [18] 。聚谷氨酸由L-谷氨酸或D-谷氨酸通过γ-酰胺键结合而成，γ-聚谷氨酸结构中包含大量游离的羧基，具有强大的吸水性，同时其高分子属性，使之在水溶液中形成三维网络结构，具有较强的锁水性能 [19] 。
电容法可对皮肤角质层的水分含量进行定量，能够灵敏地反映皮肤水分含量的变化且重现性好，是目前保湿剂功效评价常用的方法之一，Corneometer CM 825常被用于测试皮肤表皮角质层(60~100 μm)的含水量。本试验通过电容法实验，对使用哈本即雾高透水光仪不同档位联合透明质酸钠保湿舒缓精华液针的受试者进行皮肤角质层的含水量测试，考察样品的保湿作用。研究结果显示，空白对照区域1、2、3小时后，皮肤角质层水分含量与基础值相比无显著性变化(p ≥ 0.05)，4小时后显著下降(0.01 ≤ p < 0.05)，下降率为2.44%。使用产品1、2、3、4小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域皮肤角质层水分含量与基础值相比均有显著性上升(p < 0.001)。受试者单次使用试验产品后1、2、3、4 小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档、低档区域皮肤角质层水分含量与基础值相比均有显著性上升(p < 0.001)，尤其哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档上升明显，4小时后改善率仍有92.7%。受试者单次使用试验产品后1、3、4小时，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档区域的皮肤角质层水分含量改变值与哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域相比有显著性上升(0.01 ≤ p < 0.05)；2小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪高档区域的皮肤角质层水分含量改变值与哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域相比有显著性上升(0.001 ≤ p < 0.01)；受试者单次使用试验产品后1、2小时后，哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液 + 哈本即雾高透水光仪低档区域的皮肤角质层水分含量改变值与哈本透明质酸钠保湿舒缓精华液区域相比有显著性上升(p < 0.001)。3、4小时后，同样显著上升(0.01 ≤ p < 0.05)、(0.001 ≤ p < 0.01)。
结果表明，透明质酸钠保湿舒缓精华液能显著增加皮肤角质层水分的含量，哈本即雾高透水光仪联合透明质酸钠保湿舒缓精华液具有协同增效作用，其中以低档位改善作用最强。
本研究主要关注精华液的保湿作用，以及水光仪仪器与精华液联合使用，对角质层水分含量提升的协同增效作用，对于各成分的皮上残留，以及进入皮肤各层的具体情况，本研究暂未涉及，后续将进一步开展更深入研究。
参考文献