摘要:
白灵菇作为一种珍稀食用菌,提高其产量及质量具有重要的现实意义,而漆酶对真菌的生长发育具有重要影响。本文根据侧耳科漆酶基因共同保守序列,设计引物,利用RT-PCR的方法,克隆白灵菇漆酶序列,经测序获得其cDNA序列。为进一步获得该漆酶基因序列,以白灵菇基因组DNA为模板,PCR扩增出长2606 bp的漆酶基因DNA片段,DNA经纯化后克隆到pGM-T载体上,经筛选、PCR鉴定、序列分析,证明该片段为完整的白灵菇漆酶基因(GenBank注册号KC789845)。对基因序列的内含子/外显子进行分析,分析结果与经反转录测序获得的cDNA序列一致。该基因的开放阅读框由1596个核苷酸组成,编码一个由531个氨基酸组成的多肽(GenBank登录号AGO64758.1),Protein Blast 分析结果表明,该基因含有3个铜氧化酶(Cu-oxidase)保守结构域,并具有高度保守的漆酶特征序列L3;又进一步对白灵菇漆酶二级结构进行分析,并通过 SWISS-MODE预测了该酶的三维结构。