1. 引言
地胆草，为菊科地胆草属植物，主要用于治疗感冒、扁桃体炎、眼结膜炎、黄疸和湿疹等症，有清热、凉血、解毒和利湿的功效。据文献报道地胆草的主要化学成分为倍半萜内酯、三萜、黄酮及甾醇等化合物 [1] ，其中倍半萜内酯具有一定的抑制肿瘤及细胞毒作用 [2] ，但其三萜类主要成分的抗肿瘤效果尚未见报道。地胆草三萜提取物的主要成分为羽扇豆醇，羽扇豆醇(Lupeol)是一种来源于草莓、芒果等多种果蔬及中草药等植物的五环三萜类化合物。药理学研究表明：羽扇豆醇具有广泛的药理及生物学活性，如抗肿瘤、抗风湿、抗氧化、预防基因突变、抗炎、抗疟疾等 [3] 。同时分子药理学证据显示羽扇豆醇对小鼠黑色素瘤有抑制生长及诱导分化作用、对小鼠皮肤癌、乳腺癌、前列腺癌细胞和肝癌细胞等都具有抑制作用，同时对人卵巢癌细胞也具有一定的抑制作用 [4] - [9] 。本实验旨在前期地胆草中羽扇豆醇提取研究的工作基础上，观察并探讨地胆草三萜提取物的主要成分羽扇豆醇对S180小鼠体内抗肿瘤作用的影响。
2. 材料与方法
2.1. 材料
实验动物：SPF级健康雄性昆明种小鼠，体重(20 ± 2) g，由赣南医学院实验动物中心提供。S180肉瘤株，由中国医学科学院医药研究所提供。
仪器：连续光谱多功能酶标仪(Varioskan Flash)，美国Thermo Fisher公司；倒置相差显微镜(CKX 41)，日本Olympus公司。
羽扇豆醇对照品，购于Alfa公司，HPLC检测其纯度 ≥ 98%。地胆草三萜提取物，赣南医学院药学院药物化学实验室制备。
2.2. 实验方法
2.2.1. 瘤株移植方法 [10]
S180细胞株经昆明种小鼠腹腔内移植传代，经过一周培养后，通过无菌操作抽取小鼠内的腹水瘤细胞液，通过离心，弃去上清，用无菌生理盐水配制浓度为1 × 107个/mL，然后在每只小鼠的右腋皮下接种0.2 mL，建立小鼠实体瘤模型。
2.2.2. 分组及给药
取健康雄性小鼠40只，随机分成五组，依次为空白组、阳性对照组以及地胆草提取液低(5 g/kg)、中(10 g/kg)、高(20 g/kg)剂量组，每组8只，接种24 h后开始给药。环磷酰胺腹腔注射给药，注射剂量为25 mg/kg，连续给药7 d，其余为灌胃给药，每连续14 d。
2.2.3. 观察指标
通过观察并记录小鼠的生长、体重等变化，通过以下公式计算抑瘤率、胸腺指数和脾脏指数：
1) 抑瘤率/% = (对照组平均瘤重 − 给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重 × 100%；
2) 胸腺指数 = 胸腺平均质量(mg)/平均体质量(g)；
3) 脾脏指数 = 脾脏平均质量(mg)/平均体质量(g)。
2.2.4. 统计学方法
数据分析采用SPSS17.0统计软件进行分析，其计量数据以
表示，使用方差分析，P < 0.05表示差异有统计学意义。
3. 方法与结果
3.1. 抗肿瘤作用药理试验
3.1.1. 地胆草三萜提取物对S180实体瘤的抑瘤作用
对S180荷瘤小鼠体内进行了抑瘤分析：由表1实验结果表明，三个剂量组的地胆草三萜类提取物对S180荷瘤小鼠的肿瘤生长有明显抑制作用，且呈一定的量效关系，最高抑瘤率达44.12%。阳性对照组(环磷酰胺)抑瘤率为62.35%。
3.1.2. 地胆草三萜提取物对S180荷瘤鼠存活时间的影响
通过表2结果分析显示：对照组的小鼠由于受到实体瘤的影响使得小鼠的机体免疫力明显降低，导致其生存时间大为缩短。给药组与对照组相比，地胆草提取物低、中、高剂量组能在一定的范围内提高S180小鼠的存活时间，提高率分别为22.55%，33.33%，36.27%，结果表明地胆草提取物对小鼠瘤有较好的抑制效果。此外，结果显示环磷酰胺组可以非常有效地提高S180荷瘤的存活时间，其存活率提高至54.90%，即环磷酰胺组能够显著抑制S180实体瘤的生长。
3.1.3. 地胆草三萜提取物对S180荷瘤鼠免疫器官的影响
由表3数据可知，环磷酰胺组实验的小鼠的胸腺质量具有明显的下降，而由于充血坏死原因导致肝
Table 1. Effect of triterpene extraction on the tumor growth of S180 solid tumor mice ( x ¯ ± s , n = 8 )
表1. 地胆草三萜类提取物对S180荷瘤小鼠肿瘤生长的影响
注：*表示与对照组相比，P < 0.05。
Table 2. Effect of triterpene extraction on the survival time of S180 solid tumor mice
表2. 地胆草三萜提取物对S180荷瘤鼠存活时间的影响
注：*表示与对照组相比，P < 0.05。
Table 3. Effect of triterpene extraction on liver and spleen index of S180 solid tumor mice ( x ¯ ± s , n = 8 )
表3. 地胆草三萜提取物对S180小鼠的脾脏、胸腺器官的影响
注：*表示与对照组相比，P < 0.05。
脏质量有一定的升高，这表明环磷酰胺对S180荷瘤小鼠有一定的免疫作用。不同剂量的地胆草三萜提取物对S180荷瘤鼠的胸腺指数和脾脏指数有一定的提高，呈现一定的浓度剂量依赖关系，即高剂量组的作用效果更明显些，该实验结果表明地胆草三萜提取物的有效活性成分羽扇豆醇在一定程度上能有效提高S180荷瘤鼠的免疫能力。
4. 结论
综上所述，本实验研究了地胆草三萜类主要成分羽扇豆醇对S180荷瘤鼠的抗肿瘤作用，结果表明地胆草三萜提取物主要成分羽扇豆醇能较好地抑制S180实体瘤的增长，延长荷瘤鼠的存活率；对S180荷瘤鼠的胸腺指数和脾脏指数有一定的提高，在一定程度上能有效提高S180荷瘤鼠的免疫能力。综上结果表明地胆草提取物三萜类主要成分羽扇豆醇具有一定的抗肿瘤效果，本研究为羽扇豆醇的抗肿瘤作用提供了一定的临床前期研究基础。
基金项目
江西省卫生厅科技计划项目(2013A043)，校级课题(YB201319)资助。