摘要: 目的：探究亚甲基四氢叶酸还原酶MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死风险因素及预后相关性，为脑梗死的二级预防及治疗提供理论支持。方法：选取2021年4月至2021年8月期间就诊于北华大学附属医院神经内科首发症状性脑梗死患者50例(男性39例，女性患者11例)，平均年龄(66.6 ± 10.54)岁。以C677T基因型进行分组：野生型组(CC)、突变组(CT TT)，收集患者一般资料、个人史、既往史、量表分数(NIHSS评分、Barthel指数)及症状复发。结果：1) 单因素分析结果显示在MTHFR (C677T)基因年龄、症状首发年龄、冠心病病史、糖尿病病史、吸烟史、饮酒史比较，差异无统计学意义(P > 0.05)；2) 单因素分析结果显示MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死患者的性别、高血压、入院时严重程度、症状复发具有相关性，差异有统计学意义(P < 0.05)；3) 在多变量分析结果显示MTHFR (C677T)是脑梗死复发的独立危险因素，CT TT基因型复发的概率是CC基因型的9.25倍，即MTHFR (C677T)基因突变时，脑梗死的复发率增高。结论：MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死的发生具有相关性，是脑梗死发生的独立危险因素。
Abstract:
Objective: To explore the correlation between MTHFR (C677T) gene polymorphism and risk factors and prognosis of cerebral infarction, and to provide theoretical support for secondary prevention and treatment of cerebral infarction. Methods: A total of 50 patients (39 males and 11 females) with an average age of (66.6 ± 10.54) were enrolled in the Department of Neurology, Affiliated Hospital of North China University from April to August 2021. Patients were divided into wild type group (CC) and mutant group (CT TT) with C677T genotype. General information, personal history, past history, scale score (NIHSS score, Barthel index) and symptom recurrence were collected. Results: 1) Univariate analysis showed no significant difference in MTHFR (C677T) gene age, age of first symptom onset, history of coronary heart disease, history of diabetes, smoking history and drinking history (P > 0.05). 2) The results of univariate analysis showed that MTHFR (C677T) gene polymorphism was associated with gender, hypertension, severity at admission and symptom recurrence of cerebral infarction patients, with statistical significance (P < 0.05). 3) Multivariate analysis showed that MTHFR (C677T) was an independent risk factor for cerebral infarction recurrence, and the recurrence probability of CT TT genotype was 9.25 times that of CC genotype, that is, the recurrence rate of cerebral infarction increased when MTHFR (C677T) gene was mutated. Conclusion: MTHFR (C677T) gene polymorphism is associated with the occurrence of cerebral infarction and is an independent risk factor for cerebral infarction.
1. 引言
脑梗死又被称为缺血性脑卒中，是指各种脑血管病变所致脑血管血液供应不足，致局部组织缺血、缺血性坏死，而迅速出现的相应神经功能缺损的一类临床综合征。脑梗死是卒中最常见的类型，大约占比70%~80%。脑梗死是临床最常见的脑血管疾病之一，有很多种影响因素，除了最基本的影响因素：吸烟、饮酒、高血压、高血糖、高血脂、动脉粥样硬化外 [1] [2] [3] ，大量的研究表明，MTHFR基因C677T突变与缺血性脑血管病密切相关 [4] - [11] 。亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)与同型半胱氨酸(Homocysteine, Hcy)在体内的代谢调节有关，MTHFR是Hcy再甲基化代谢过程中的关键酶，具有单核苷酸多态性，多态性位点的变化可导致其编码的酶活性和耐热性发生改变，从而使Hcy水平升高 [3] [12] 。有研究表明，血液中Hcy水平升高被认为是导致脑梗死发生的一个独立危险因素 [1] [2] [3] 。本研究旨在探索MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死的相关性，为脑梗死的二级预防及治疗提供理论支持。
2. 资料与方法
2.1. 研究对象
以MTHFR (C677T)基因型进行分组：野生型组(CC)、突变组(CT+TT)，使用北京华夏时代基因有限公司测序反应通用试剂盒及西安天隆基因测序仪测定MTHFR (C677T)基因型。收集患者一般资料、个人史、既往史、量表分数(NIHSS评分、Barthel指数)及症状复发。
2.2. 研究方法
以MTHFR (C677T)基因型进行分组：野生型组(CC)、突变组(CT + TT)，使用北京华夏时代基因有限公司测序反应通用试剂盒及西安天隆基因测序仪测定MTHFR (C677T)基因型。收集患者一般资料、个人史、既往史、量表分数(NIHSS评分、Barthel指数)及症状复发。
2.3. 统计学处理
采用STATA17.0软件，计数资料用构成比或率表示，分类变量采用频数及频率，连续变量使用均数±标准差进行描述；组间差异检验采用卡方检验法或Fisher确切概率法。将单因素分析P < 0.05变量纳入非条件logistic多因素回归分析，当P值小于0.05时，表示差异具有统计学意义。
3. 结果
3.1. 一般资料对比分析
以MTHFR (C677T)基因型进行分组：野生型组(CC)，突变组(CT + TT)。对比分析两组间一般资料，结果显示：在年龄及首发症状年龄无统计学差异(P > 0.05)。患者性别在两组间存在统计学差异(P < 0.05)，详见表1。
Table 1. Comparative analysis of general data
表1. 一般资料对比分析
注：两组间对比分析：*P < 0.05。
3.2. MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死风险因素相关性
以MTHFR (C677T)基因组进行分组：野生型组(CC)，突变组(CT + TT)。对比分析两组间脑梗死相关风险因素，结果显示:饮酒史、吸烟史、糖尿病、冠心病病史均无统计学差异(P > 0.05)。高血压病病史在两组间存在统计学差异(P < 0.05)，详见表2。
3.3. MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死预后的相关性
以MTHFR (C677T)基因型进行分组，野生型组(CC)，突变组(CT + TT)。对比分析两组间脑梗死预后相关评价，结果显示：Barthel指数两组间无统计学差异(P > 0.05)。两组间入院时NIHSS评分、症状复发存在统计学差异(P < 0.05)，其中，入院时NIHSS评分存在更明显的两组间差异，详见表3。
Table 2. Correlation analysis of MTHFR (C677T) gene polymorphism and risk factors for cerebral infarction
表2. MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死风险因素的相关性分析
注：两组间对比分析：*P < 0.05。
Table 3. Correlation analysis of MTHFR (C677T) gene polymorphism and prognosis of cerebral infarction
表3. MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死预后的相关性分析
注：两组间对比分析：*P < 0.05。
3.4. MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死相关因素的单变量Logistic回归分析
设MTHFR (C677T)基因野生型CC为阴性对照进行单变量logistic回归分析，纯合突变TT型与女性患者不具有相关性(P > 0.05)，杂合突变CT型与女性患者具有相关性(P < 0.05)；杂合突变CT型与Barthel指数 ≤ 60分不具有相关性(P > 0.05)；纯合突变TT型与Barthel指数 ≤ 60分具有相关性(P < 0.05)；基因突变是导致脑梗死患者高血压病、入院时NIHSS评分 ≥ 3分、症状复发的风险因素(P < 0.05)，详见表4。
Table 4. Univariate logistic regression analysis of MTHFR (C677T) gene and prognosis of complicated disease and cerebral infarction
表4. MTHFR (C677T)基因及合并疾病与脑梗死预后的单变量logistic回归分析
注：设MTHFR (C677T)基因野生型CC为阴性对照OR值为1，*P < 0.05。
3.5. MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死复发的多变量Logistic回归分析
在单因素变量logistic回归分析中，调整数据后，发现MTHFR (C677T)基因是复发的独立危险因素，而Barthel指数及入院时NIHSS评分为复发的混杂因素，将MTHFR (C677T)基因与复发、Barthel指数及入院时NIHSS评分纳入多变量logistic回归模型分析，结果显示，复发与MTHFR (C677T)基因、入院时NIHSS评分呈正相关，CT + TT基因型复发的概率是CC基因型的9.25倍，入院时NIHSS评分 ≥ 3分的脑梗死患者复发的概率是入院时NIHSS评分 < 3分脑梗死患者的1.24倍；复发与Barthel指数呈负相关，Barthel指数 ≥ 60分的脑梗死患者复发的概率是Barthel指数 < 60分脑梗死患者的0.96倍，详见表5。
Table 5. Multivariate logistic regression analysis of MTHFR (C677T) gene polymorphism and cerebral infarction recurrence
表5. MTHFR (C677T)基因多态性与脑梗死复发的多变量logistic回归分析
注：设阴性对照OR值为1，*P < 0.05。
4. 讨论
以MTHFR (C677T)基因型进行分随着老龄化进程的不断深入，脑梗死发病率逐年上升，这对家庭和社会造成了沉重的负担，因此在生活中，做好脑血管病中的预防极为重要。
一些动物实验 [13] [14] [15] 发现，MTHFR作为Hcy代谢的关键酶，参与Hcy的重新甲基化，使血浆Hcy含量保持在一个较低的水平；而最常见的MTHFR基因677位点发生的突变，影响了该酶的活性，导致血Hcy含量增加；有指南 [16] 指出当血浆Hcy水平达到10 µmol/L或以上时，被定义为高同型半胱氨酸血症(Hyperhomocysteinemia, HHcy)，而伴有HHcy的原发性高血压被称为H型高血压；且有研究显示 [17] H型高血压患者在心脑血管疾病的患病率远远高于非H型高血压患者。本研究显示(表2)，MTHFR基因突变与脑梗死的风险因素分析，提示基础疾病患有高血压疾病的患者易患有脑梗死(X2 = 1.56，P = 0.009)；在单变量logistics回归分析中(表4)，MTHFR基因突变，CT + TT基因型OR比分别是CC基因型的7.24、5.73倍，提示基础疾病存在高血压患者易患脑梗死及预后较差。因此，对人群进行MTHFR C677T基因多态性检测，以预测H型高血压易感人群，具有重要意义，可有效预防其发生。有研究发现 [18] ，无论有无脑梗死，男性患者Hcy水平显著高于女性，这可能与激素有关，他们发现，女性分泌的激素中，雌二醇可以降低血浆Hcy的水平；且日常膳食纤维摄入量和维生素的补充情况可以决定生理性Hcy水平，而女性有更好的健康饮食模式；这与本研究不一致，由于本研究样本量较少，因此得出数据会有一定的偏倚，在今后的研究中，可以通过增加样本量进一步研究它们之间的关系。
有学者发现 [19] [20] ，MTHFR (C677T)位点的突变，可以使血液中Hcy的浓度升高，而高Hcy可损伤血管内皮，引起一些炎症反应，也可导致血管平滑肌细胞的增殖以及脂代谢异常等，继而重构血管，使得血管壁的顺应性降低、舒缩功能异常，从而导致动脉粥样硬化，增加脑梗死的风险。LI等人 [4] 荟萃分析结果表明，MTHFR C677T位点的TT基因型是缺血性卒中的一个危险因素，携带TT基因型的个体比其他基因型更容易患脑卒中且风险增加 [10] 。这与本研究相符，本研究表明，在单变量Logistic回归分析中(表4)，把复发、Barthel指数 ≤ 60分、入院时NIHSS评分 ≥ 3分、高血压病纳入单变量回归分析，可以看出，MTHFR基因突变TT基因型均与脑梗死有关。本研究多因素Logistic回归分析显示(表5)，MTHFR基因突变，CT + TT基因型OR比是CC基因型的9.25倍，95% CI为(6.24~37.28)，表示MTHFR基因突变与脑梗死有关。
NIHSS评分通常用于描述神经功能状态及卒中严重程度，还有一些报道NIHSS评分可预测卒中的结局，NIHSS总分越高，增加的卒中并发症的风险越高 [21] [22] [23] [24] 。本实验研究显示：入院时NIHSS评分 ≥ 3分(表3)，突变组(CT + TT) X2 = 1.47，P = 0.01，说明入院时NIHSS评分越高，脑梗死预后越差；在单变量logistics分析中(表4)，入院时NIHSS评分 ≥ 3分，突变组(CT+TT)的OR比分别是野生型(CC)的4.37、6.29倍，P值分别为0.046、0.013，说明MTHFR突变与脑梗死有关，且TT基因型更易患脑梗死；在表(5)中，入院时NIHSS评分 ≥ 3分95%为(1.01~12.83)，P = 0.047，提示入院时NIHSS评分越高，脑梗死预后越差。在(表3)中，突变组(CT + TT) X2 = 1.25，P = 0.02，提示突变组易患脑梗死；在(表5)，把MTHFR突变纳入脑梗死的多变量回归分析中，突变组(CT + TT) OR比是野生型(CC) 9.25倍，95% CI为(6.24~37.28)，P = 0.018，说明突变与脑梗死复发具有相关性。在单变量logistics回归分析中显示(表4)，突变组TT基因型OR比是CC基因型的6.35倍，95% CI为(1.56~27.63)，P = 0.021；这表明Barthel指数越高，TT基因型脑梗死患者的预后较CT及CC基因型差。
5. 结论
综上所述，MTHFR (C677T)基因突变可以导致脑梗死，对脑梗死的复发、预后有很大的影响。本研究也有局限性，首先是没有时间推移，对脑梗死预后的评估只有1年，无3年、5年的预后评估，这有待进一步研究；其次本研究时间较短，研究样本量有限，因此本研究结论尚需多中心更大样本量的临床研究予以证实。
基金项目
吉林省教育厅科学技术研究项目(JJKH20210062KJ)；吉林省发展和改革委员会自主创新能力(2021C018)。
NOTES
*通讯作者。