摘要:
生长在马桑树上的野生香菇(Lentinus edodes Sing.)，别名马桑菌；五里香。春秋季生于马桑树【马桑(Coriaria sinica Maxinm)隶属马桑科，全株含马桑碱】的枯枝上。文章通过野生香菇的标本采集，培养基的制作，菌种分离培养，菌种转接培养，菌种形态特征鉴定以及出菇试验，最终获得野生香菇菌株。
Abstract:
The wild letinus edodes (Lentinus edodes Sing.), which is grown on the coriaria sinia, is named “five Li Xiang”. Born in the spring and autumn period, Coriaria sinica Maxinm belongs to the Coriariaceae, and the whole plant contains the Coriaria sinica alkali, and the branches are on the top of the trunk (see Figure 1, Figure 1). Through the collection of the wild letinus edodes, the production of the culture medium, the isolation and culture of the strains, the culture of the strains, the identification of the morphological characteristics of the strains and the test of the mushroom, the wild letinous edodes strain was finally obtained.
1. 引言
贵州野生马桑香菇的形态特征：子实体较小，菌盖直径4~10厘米，表面棕色至褐色，光滑无鳞片<香菇常带有白色或与菌盖同色的鳞片>，由于野生马桑香菇生长环境的气候变化，日夜温差大和高山风力大的原因，多数香菇菌盖龟裂形成多种多样的花纹，并具浓郁的香菇香味；菌褶较窄，褶缘平直<其它品种褶缘锯齿状>，与菌柄成凹生、直生，少数延生；菌柄侧生或中央生，白色或微黄，表面光滑，有时下部多绒毛（一般香菇多数覆绒毛或鳞片），由于生在枯枝立木上的原因，多数弯曲。孢子较小，4~5.5 × 2.5~3.5微米，椭圆形，光滑无色；菌丝白色，绒毛状，受日照或温度超过28℃时容易变为褐色 [1] (见图1，图2)。
2. 马桑香菇一级菌种培养基
马铃薯–葡萄糖–琼脂培养基(Potato dextrose agar ) P.D.A；
马铃薯200 g葡萄糖20 g；
琼脂15 g H2O 1000 ml。
3. 培养基的制作 [2]
用200克马铃薯去皮，挑去芽眼，切成薄片，在100℃热水中煮开约15分钟至马铃薯酥而不烂即可，用4层纱布过滤，去渣，加水至1000 ml，加入琼脂、蔗糖等，在火上加热，充分搅拌，使琼脂溶化，然后分装入试管，分装量为试管长度的1/4，分装时试管管口不得沾染培养基，塞上棉塞，棉塞不宜过松或过紧，将装好培养基的试管置于高压锅中灭菌(1.5 kg/cm2压力) 40分钟，灭菌后趁热做成斜面(见图3)。
4. 菌种分离 [2]
1) 取当天采集的新鲜未开伞或刚开伞的野生马桑香菇子实体，剪去菌柄基部，用无菌脱脂棉檫去菌盖上的杂物，装入经过灭菌的塑料袋，放到塑料盒中并及时带回实验室；
2) 用75%酒精棉檫拭上述塑料袋外壁，移到超净工作台，无菌条件下，用解剖刀划开上述无菌塑料袋一小口，使菌盖顶部刚好露出，再用解剖刀削去菌盖表皮，露出菌盖内的白色组织，在盖上与菌柄结合部用解剖刀挑取白色组织约3~5 mm大小组织块接入试管培养基上部，使其与培养基有较好接触；
5. 菌种培养与转接 [2]
1) 将上述分离的试管菌种置于20℃~25℃恒温箱培养，每天观察接入的野生马桑香菇组织块的萌发状况：若组织块及周围无污染，单菌落，为正常，菌种分离成功；否则为污染，要及时检出；
2) 对上述正常萌发，形成单一菌落的试管一级菌种，不等长满试管，当菌丝萌发生长，在培养基上形成一圈直径为2~4 cm菌落时，及时转接，使之纯化；转接所用的培养基和第一步中的培养基相同，转接方法如下：
2.1) 在超净工作台无菌条件下，用接种针挑取菌落边缘菌丝体，转接到另一支试管培养基上，置于20℃~25℃恒温箱培养，每天观察接入菌丝体生长情况，菌丝体生长吃料，生长整齐，浓密，健壮，无污染，为正常，进入下一步；
2.2) 在按与2.1相同方法，再进行2次以上的转接，形成马桑香菇一级菌种。
6. 马桑香菇二、三级菌种菌种培养基及制作
6.1. 培养基
马桑木屑80%，麸皮18%，过磷酸钙1%，蔗糖1%；
要求：
马桑木屑：无霉变，含水量 ≤ 12%，粉碎颗粒 ≥ 5 mm；
麸皮：无霉变，含水量 ≤ 13%；
过磷酸钙：含有效P₂O₅ 14%~20%，其中80%~95%溶于水 [3] ；
蔗糖：市售食用等级；
培养基含水量达到：50%~55%。
6.2. 制作
第一步，原料准备：质量百分比：马桑木屑80%，麸皮18%，过磷酸钙1%，蔗糖1%；
第二步，培养基制作：称取上述配方的马桑木屑于容器中，加入沸水使其全部淹没原料，浸泡24小时，过滤去水分，加入上述的麸皮、过磷酸钙、蔗糖，搅拌均匀，形成培养基；检查并调整培养基的水分，使培养基含水量达到50%~55%。
第三步，装瓶和装袋：将上述培养基装入菌种瓶中或菌种袋中，装量至菌种瓶瓶肩或菌种袋的3/4长度，压紧瓶内或菌种袋表面的培养基，菌种瓶松紧程度为：将菌种瓶倒置，培养基不下落；菌种袋培养料的松紧程度为，检查菌种袋表面培养料均匀即可，用清水洗净瓶外或菌种袋外部，再用纱布伸进瓶内或菌种袋内，洗净瓶口瓶肩或菌种袋内空置部分，然后檫干瓶口或菌种袋内空置部分水分(见图4；图5)，将菌种瓶塞上棉塞，菌种袋套上菌环并盖上菌盖。
第四步，灭菌：把装好培养基菌种瓶和菌种袋放入高压蒸汽灭菌锅中，在1.5 kg/cm2压力下，保持1 h；将灭菌好的菌种瓶移到超净工作台内，让其自然冷却，形成成品菌种瓶和菌种袋培养基(见图6)。
6.3. 菌种转接
马桑香菇二、三级菌种的转接：
在超净工作台无菌条件下，用接种针挑取一级菌种(胡豆大小)转接入成品菌种瓶或菌种袋中，然后置于20℃~25℃恒温箱培养，每天观察接入一级菌种的生长情况，若菌丝生长整齐，浓密，健壮，无污染，即为正常的马桑香菇二级菌种或菌种出菇袋。
Figure 3. Primary test tube culture medium
图3. 一级试管培养基
Figure 4. Medium for secondary and tertiary strain bottles
图4. 二、三级菌种瓶培养基
6.4. 马桑香菇菌种的鉴定
出菇试验：待菌丝长满菌种瓶或菌种袋进行转色出菇 [3] (见图7；图8)。
Figure 5. Culture medium for secondary and tertiary bacterial
图5. 二、三级菌袋培养基图
Figure 6. Sterilized strain bottle and strain bags (strain to be transferred)
图6. 灭菌的菌种瓶和菌种袋(待转接菌种)
Figure 7. Wild mulberry mushroom primordia cultivated
图7. 栽培的野生马桑香菇原基图
Figure 8. Mature Lentinula edodes fruiting body
图8. 成熟的马桑香菇子实体
7. 讨论
通过对马桑香菇的驯化栽培结果，目前该品种马桑香菇市场反映很好，并深受市民欢迎，具有广阔的推广应用前景。在马桑香菇的驯化栽培过程中发现，马桑香菇只有采用马桑椴木栽培或采用马桑树枝粉碎成木屑栽培，才能长出马桑香菇子实体，采用其他树种或木屑栽培马桑香菇，菌丝体生长良好，但未能长出马桑香菇子实体。植物马桑树属速生树种，野生资源极为丰富，在贵州各地均有分布，马桑树种不能作为燃料(不易燃烧)，也不能作为用材林(该树种在生长过程中容易弯曲)，加之马桑树植物对生长环境要求不高，只要人们对自然生态环境加以保护，马桑香菇的栽培原料是非常丰富的，因此发展贵州马桑香菇的栽培是很有希望的。
基金项目
贵州省科技计划项目；黔科合支撑[2016] 2600；贵州省科技计划项目；黔科合支撑[2017] 2510-1；贵州省基金项目：黔科合基础[2018] 1147
NOTES
*通讯作者。