1. 引言
水丝蚓又称红虫、丝蚓和线虫等，其体形如蚯蚓，细长如丝，体色红褐色，具有捕食污泥的作用，是淡水水域中的常见底栖动物 [1]。国内外采用水丝蚓作为生态系统变化和水质污染的敏感指示物，用来评价不同物质对环境的污染程度 [2] [3]。此外，水丝蚓也被人工养殖，用于鱼类和虾类等的饲料，但由于其生长环境特殊，新鲜的水丝蚓不易长途运输和保存，故影响水丝蚓的开发和利用 [4] [5] [6] [7]。本试验采用水解冻和自然解冻两种不同的解冻方法，对常规冷冻和微冻冷冻的水丝蚓样品进行解冻，并统计分析水丝蚓的完整率，比较不同解冻方法对水丝蚓完整性的影响，以期为水丝蚓的保存和利用提供基础研究数据。
2. 试验材料
选取新鲜水丝蚓300~500 g装袋封口，样品数量共4袋，分为两组：3袋样品进行微冻冷冻组处理：将微冻机开机，并设定微冻液温度为−28℃。将装有水丝蚓的塑料袋置于微冻液中，约30分钟后见水丝蚓材料均冻结后取出，置于−20℃冰柜中冷冻保存；1袋样品进行常规冷冻：直接放入−20℃冷冻。两组样品保存7天后取出进行解冻试验。
3. 试验方法
1) 水解冻组与自然解冻组
将保存于−20℃冰柜7天的4袋样品取出，每个样品各取出100 g左右，其中50 g放于装有水的平皿中作为水解冻组，50 g放于干净的平皿中作为自然解冻组。
2) 取样观察并计数
对于水解冻组，待解冻完全后，用玻璃棒缓慢的搅拌均匀，1 ml移液器吸取200 ul稀释于装有水的平皿中，然后用较细玻璃棒将水丝蚓轻轻的铺开，对每组样品进行标记、拍照及记录，打印后统一进行水丝蚓个体的完整及断裂数量的统计并计算完整率。而对于自然解冻组，需向完全解冻后的平皿中倒入一定量的水，然后进行相同的操作。
3) 数据处理与分析
所得数据在Excel 13.0和SPSS 23.0软件上进行统计分析并作图。各处理组间进行单因素方差分析，利用T.TEST统计分析差异显著性。
4. 结果
1) 两种不同解冻方式下样品的整体性观察
常规冷冻和微冻冷冻保存的样品，在水中解冻50 g需要约1个小时，而自然解冻需要约2个小时，从时间上来看，水解冻快，自然解冻速度相对较慢；但从样品中每条水丝蚓的完整性来看，水解冻后长且完整的水丝蚓比自然解冻的少(图1)。
Figure 1. Overall observation of samples after water thawing and natural thawing
图1. 样品在水解冻和自然解冻之后的整体观察
2) 两种不同冻存方式下样品的整体性观察
从水解冻和自然解冻的时间来看，微冻冷冻的样品比常规冷冻的样品要花费更多的时间才能完全解冻。但解冻后，从整体上观察不到两种保存方式之间的差别(图1、图2)。
Figure 2. Samples placed in water after natural thawing
图2. 自然解冻后置于水中
3) 两种不同解冻方式下水丝蚓个体的完整性观察及计数统计
经过水中稀释后，分别对每组样品中完整和断裂的水丝蚓个体进行计数(图3、图4及表1)。
Figure 3. Sampling and counting after thawing in water
图3. 水中解冻后取样计数
Figure 4. Sampling and counting after natural thawing
图4. 自然解冻后取样计数
Table 1. Analysis of Limnodrilus in each group of samples
表1. 每组样品中水丝蚓的取样计数分析
利用T.TEST分别统计分析两种冻存方式下，不同解冻方式对水丝蚓完整率的差异性，从图5中可见，水解冻和自然解冻对于常规冷冻水丝蚓完整率的影响差异不显著(P > 0.05)，而对于微冻冷冻的水丝蚓，自然解冻后其完整率显著高于水解冻(P < 0.05)。
注：*表示差异显著(P < 0.05)。
Figure 5. Statistical analysis of two different thawing methods on the integrity rate of Limnodrilus
图5. 两种不同解冻方式对水丝蚓完整率的统计分析
5. 讨论
已有的研究表明，水丝蚓含有丰富的蛋白质、脂肪、多种维生素和矿物质等营养元素 [8]。其不饱和脂肪酸含量丰富，干品的蛋白质含量达50%，脂肪含量达18%。因而，水丝蚓是水产养殖鱼类、虾类的优质饵料 [9]。本试验开展了水丝蚓冷冻和解冻试验，采用水解冻和自然解冻两种方法，对常规冷冻和微冻冷冻的水丝蚓样品进行解冻，通过对解冻后完整和断裂的水丝蚓个体进行计数，并统计分析水丝蚓的完整率，据此来探讨了哪种解冻方式更适合于水丝蚓的保存和应用。
本研究结果表明，常规冷冻水丝蚓的完整率不受两种解冻方式的影响，微冻冷冻水丝蚓经过自然解冻后的完整率要高于水解冻后的完整率，其可能的原因是水丝蚓样品经过冻存，其表皮等组织遭到破坏，在水中由于渗透压等因素的影响更容易造成个体的断裂，从而不能保持其原有的完整状态。因此，对于冻存的水丝蚓样品应采取自然解冻的方式，以尽量减少水丝蚓由于解冻方式的不同而造成的完整性下降，以及水丝蚓个体本身营养成分的流失。
基金项目
上海市农委科技兴农重点攻关项目(2017-02-08-00-08-F00070)。
参考文献