摘要:
六斑刺鲀作为一种具有重要开发潜力的品种，受精卵的孵化是影响其人工繁殖成败的关键因素之一，孵化率的高低直接影响着后期苗种的培育及扩繁。本研究针对这一技术问题，经过反复摸索研究，设计适宜的孵化设施及孵化方法，大大提高了六斑刺鲀受精卵的孵化率，为今后工厂化养殖提供一定的技术支持。
Abstract:
As a kind of Diodon holocanthus with important development potential, the hatching of fertilized eggs is one of
the key factors affecting the success or failure of artificial reproduction,
and the hatching rate directly affects the cultivation and propagation of later
seedlings. This study aimed at this technical problem, through repeated
exploration and research, designed suitable incubation facilities and
incubation methods, greatly improved the hatching rate of fertilized eggs of Diodon
holocanthus, and provided certain technical support for the future factory
breeding.
As a kind of Diodon holocanthus with important
development potential, the hatching of fertilized eggs is one of the key
factors affecting the success or failure of artificial reproduction, and the
hatching rate directly affects the cultivation and propagation of later seedlings.
This study aimed at this technical problem, through repeated exploration and
research, designed suitable incubation facilities and incubation methods,
greatly improved the hatching rate of fertilized eggs of Diodon holocanthus,
and provided certain technical support for the future factory breeding.
1. 引言
六斑刺鲀(Diodon holocanthus)为硬骨鱼纲(Osteichthyes)，辐鳍鱼亚纲(Actinopterygii)，鲀形目(Tetraodontiformes)，二齿鲀科(Diodontidae)中的一种鱼类，俗名气瓜仔、刺规等 [1] [2]。其分布广泛，亚热带至热带海域均有分布。喜独居生活，幼鱼则行漂游性生活。主要栖息于浅海礁石区、软质底海域或开放性水域，属海洋性底层鱼类。同时，六斑刺鲀由于形态呆萌，性情温和，游速缓慢，人工繁育的六斑刺鲀更易亲近人类，在观赏鱼市场中也具有较高的关注度 [3] [4]。
六斑刺鲀作为一种具有重要开发潜力的品种，目前其来源基本仍是海上捕捞，由于六斑刺鲀具有明显的季节性独居生态特性，导致其渔获量不高，加之过度捕捞致使六斑刺鲀野生资源受到破坏 [5] [6]，自然资源量也随着过度捕捞呈锐减趋势，导致食用市场和观赏鱼市场都供不应求。目前六斑刺鲀人工繁育技术虽已被突破 [7]，但受精卵的孵化条件和孵化管理存在缺陷，最终导致受精卵的孵化率偏低，严重影响苗种培育的最终产量。为找出适宜的孵化方法，本研究针对六斑刺魨受精卵的特性，设计不同与常规鱼类受精卵的孵化设备，并改进孵化方法，最终得出能有效提高六斑刺魨受精卵孵化率的孵化方式，完善苗种培育流程，为后期工厂化育苗提供参考资料。
2. 材料与方法
六斑刺鲀来自海南省潭门港，捕自南海东沙群岛海域。收购时挑选体表无伤、鳍条完整，应激状态下能迅速潜逃、举刺或鼓气的个体，平均体长23.3 ± 1.0 cm、平均体重858.0 ± 98.1 g。运回实验基地后先用2 ppm甲醛的淡水浸泡10 min，再放入2口32 m3水体的水泥池中进行5 d的适应性暂养 [8]。暂养水温28℃ ± 2℃，盐度33.0 ± 0.5，pH 8.2~8.3，24 h不间断充气，采用黑暗沉淀加沙滤的同温同盐洁净海水，每天更换400%洁净海水的方式保持水质稳定 [9] [10]。
(一) 孵化设施设计
实验分为A组和B组。A组的孵化设施由直径2.5 m、深1.5 m的圆形水泥池和直径2 m、高度1.2 m的40目筛绢网做成的孵化网箱组成，孵化网箱放置于圆形水泥池的中间。孵化网箱上半部为直径2 m，高度1 m的圆柱形，下半部为直径2 m，高0.2 m的圆锥形，圆锥形底部设有铅坠。孵化设备结构图见图1。上、下均用2 mm不锈钢丝围绕成直径为2 m的园环，与四周与孵化网箱绑在一起，支撑整个孵化网箱，上不锈钢园环再用绳索固定于孵化水泥池边缘。在孵化网箱内布置6个充气的气石，其中5个沿下不锈钢园环均匀分布，另1个气石布于孵化网箱中央最底部。孵化网箱最底部距离圆形水泥池底部约10 cm。采用底部进水，上层溢水的方式保持水的流动。B组的孵化桶采用传统的上口直径0.8 m、高度0.6 m的锥形孵化桶，内壁颜色为黑色，充气头置于桶底部。采用上层中央进水、桶四周溢水的方式保持水的流动。
注：1. 绳索连接件，2. 上圆环，3. 排水口，4. 孵化池，5. 充气管，6. 孵化网箱，7. 下圆环，8. 充气石，9. 坠物，10. 进水口 Note: 1. Rope fitting; 2. Top Circle; 3. Drain; 4. Hatchery; 5. Inflator Tube; 6. Hatchling cage; 7. Lower Circle; 8. Inflatable Rock; 9. The pendant; 10. Water Inlet
Figure 1. Schematic diagram of an improved incubation facility
图1. 改进的孵化设施示意图
(二) 孵化方法
将A组和B组的孵化设备均用10 ppm的次氯酸钠消毒，再用同等量的硫代硫酸钠中和，曝气24 h后，加0.5 ppm的EDTA，持续充气12 h后备用。经驯养强化培育后即对六斑刺鲀进行催产，采用绒毛膜促性腺激素(HCG) + 促黄体素释放激素类似物-A2 (LRH-A2)，每公斤鱼的催产剂量为：600国际单位的HCG + 10 µg的LRH-A2，催产时效40 h [11] [12] [13]，之后六斑刺鲀会在晚上自然产卵，次日凌晨用40目的筛绢抄网收集浮在水面上的受精卵。将收集到的受精卵用干净海水反复漂洗去除杂质以及沈底的死卵，将洗净的受精卵放置在海水水桶中，加1 ppm的甲醛杀菌消毒10 min，杀菌期间保持连续充气。随后用40目的抄网捞捞出，再用干净海水冲洗1、2次，放入已准备好的孵化设施内A组和B组孵化设备中，二组的受精卵密度均为8000~10,000粒/m3，孵化期间持续充气，微流水，使每d换水量达到200%~300%。孵化盐度30~32，温度28.5℃~29.5℃，pH 8.0~8.3，溶氧保持在>6 mg/L，每天观察胚胎发育情况和孵化出膜后初孵仔鱼形态特征并做记录，观察孵化率、初孵仔鱼全长、畸形率、卵黄囊容积和油球个数。
3. 数据处理
所得数据用SPSS13软件处理。对不同实验方法取得的结果进行单因素方差分析。当显著差异(p < 0.05)时采用Duncan多重比较；用t检测检验二种孵化设备的孵化结果；用Excel进行图形处理。
4. 结果
两种孵化条件下六斑刺鲀胚胎的孵化结果见表1。实验组A和对照组B的孵化时间在相同水温等环境条件下，首尾初孵仔鱼所需的孵化时间分别为172 h和173 h。50%胚胎孵出所需的时间都是180 h。2组的初孵仔鱼全长、卵黄囊容积(包括油球容积)均无显著性差异(p > 0.05)。而孵化率及初孵仔鱼的油球数和孵出后的畸形率在2种孵化条件下差异显著(p < 0.05)。
Table 1. Hatching rate, malformation rate and morphological characteristics of newly hatched larvae under different hatching methods
表1. 不同孵化方法条件下孵化率、畸形率和初孵仔鱼的形态特征
注：数据上标*表示同列数据差异显著(p < 0.05)。
5. 小结
海水鱼类受精卵的孵化技术是影响其人工繁殖成败的关键因素之一，孵化率的高低直接影响着后期苗种的培育 [14]。鲀形目中多部分种类的受精卵多为粘性卵，如，东方鲀属中的菊黄东方鲀(Fugu flauidus)、星点东方鲀(Takifugu niphobles)，马面鲀属中的绿鳍马面鲀(Thamnaconus septentrionalis )等 [15] [16] [17] [18]，而刺鲀属中的六斑刺鲀受精卵则为浮性卵，受精卵径也较鲀形目中其他种类要大 [19]，平均达到1.8 mm。若在孵化过程中未能使胚胎分离导致重叠，就很容易使堆积在一起的胚胎造成缺氧而致死，导致孵化率降低。从本实验的2种孵化设施看，在相同水温、相同密度等环境条件下，首尾初孵仔鱼所需的孵化时间和50%胚胎孵出所需的时间均差异不显著，初孵仔鱼全长和卵黄囊容积也无显著性差异(p > 0.05)，可以说明在此孵化环境条件下对孵化时间无显著影响，孵化过程中胚胎的耗能也差异不显著。鉴于实验组和对照组的胚胎取自同一批次的受精卵，但实验组初孵仔鱼的畸形率显著低于对照组，初孵仔鱼的油球数也明显少于对照组。分析导致差异显著的原因可能是，实验组底部6个充气头能保证水的流动更加充分，确保了孵化网箱中无死角，胚胎不被重叠堆积。对照组虽然也采用了底部进水上口溢水的流水方式，并在桶底部置有1个充气头，但不能保证孵化的所有时间段内胚胎不重叠。推测重叠的胚胎可能导致局部缺氧使发育滞缓，最终影响到孵化容器内的胚胎孵化率。
基金项目
中央级公益性科研院所基本科研业务费(2189-2018)。
NOTES
*第一作者。