摘要: 目的：了解于我院就诊的地中海贫血基因检测人群的地中海贫血基因分布情况及阳性率。方法：分析2021年1月1日至2021年6月31日于桂林第924医院就诊的地中海贫血基因检测人群1165例，并对其地贫基因进行统计分析。结果：1165例受检标本中检测出携带地贫基因标本186例，阳性率为15.96%；其中检测出α-地中海贫血标本129例，β-地中海贫血标本52例，αβ-复合型地中海贫血5例。α-地中海贫血基因类型主要以
--SEA/αα为主(52.71%)，其次为-α
3.7/αα (24.03%)和-α
4.2/αα (9.30%)；β-地中海贫血基因类型主要以CD41-42位点突变为主(46.15%)，其次是CD17、IVS-II-654、CD71-72和-28，分别占β-地中海贫血的23.08%、7.69%、7.69%和7.69%。结论：桂林地区地中海贫血基因携带率较高，α-地中海贫血基因型中以--SEA/αα最为常见，β-地中海贫血中最常见的位点突变为CD41-42，应对该地区育龄人群加强地中海贫血相关知识的宣传，促进优生优育。
Abstract:
Objective: To investigate the positive rate and distribution characteristics of thalassemia gene in patients with thalassemia tested in our hospital. Methods: From January 1, 2021 to June 31, 2021, 1165 patients with thalassemia gene test in Guilin No. 924 Hospital were analyzed, and their thalassemia genes were statistically analyzed. Result: Among 1165 samples, 186 were found to carry thalassemia gene, with a positive rate of 15.96%. Among them, 129 cases of α-thalassemia genetic, 52 cases of β-thalassemia genetic and 5 cases of αβ compound-thalassemia were detected. α-thalassemia genetic type is given priority with --SEA/αα (52.71%), followed by -α3.7/αα (24.03%) and -α4.2/αα (9.30%); The main gene types of β-thalassemia were CD41-42 (46.15%), followed by CD17, IVS-II-654, CD71-72, and -28, accounting for 23.08%, 7.69%, 7.69% and 7.69% of β-thalassemia, respectively. Conclusion: The thalassemia gene carrying rate is high in Guilin area, --SEA/αα is the most common among α-thalassemia genotypes, and the most common mutation site of β-thalassemia is CD41-42. It is necessary to strengthen the publicity of thalassemia related knowledge among the population of childbearing age in this area, and promote prenatal and postnatal care.
1. 前言
地中海贫血简称“地贫”，是由于珠蛋白基因的缺失或者缺陷使某种珠蛋白链合成受到抑制而引起的溶血性贫血，是一种对人类健康及生存质量有一定影响的单基因遗传病 [1] [2]。临床上根据珠蛋白肽链合成受到抑制的情况不同，分为α、β、γ和δ地中海贫血，其中以α和β地中海贫血较为常见。有研究报道，全球约7%的人口携带地中海贫血基因，地中海贫血具有明显的地域性，且其发病率在我国主要表现为南方高北方低的分布特点 [3] [4]。目前对于地中海贫血的治疗还未有有效的治愈方法，因此预防中重型的地贫患儿的出生不仅可以减轻家庭和社会的负担，还有助于提高我国人口的出生质量 [5]。本研究主要对于我院就诊的桂林地区地中海贫血基因检测人群的检测结果进行了分析。
2. 资料与方法
2.1. 一般资料
对2021年1月至2021年6月到我院进行地中海贫血筛查者1165例进行回顾性分析，年龄为1~78岁，平均年龄为(34.26 ± 7.54)岁，其中男性592例，女性573例。所有进行地中海贫血筛查者均知情同意，并签署知情同意书。
2.2. 试剂与仪器
2.2.1. 试剂
全血DNA提取试剂及地贫基因检测试剂盒为深圳亚能生物有限公司产品。
2.2.2. 仪器
PCR扩增仪为杭州朗基MG96+。
2.3. 方法
2.3.1. 采血标准
所有研究对象均抽取2 mL静脉血于EDTA管中，轻轻颠倒混匀并置于4˚~8˚冰箱中保存备用。
2.3.2. 地中海贫血基因检测
采用Gap-PCR法对缺失型α-地中海贫血3种常见缺失基因型：--SEA、-α3.7和-α4.2进行检测，采用PCR-反向点杂交法对3种非缺失型α-地中海贫血基因(αQS, αCS, αWS)和17种常见β-地中海贫血基因(CD41-42, βE, CD43, CD71-72, IVS-II-654, -28, -29, -30, -32, CD14-15, CD27-28, CD31, IVS-I-1, IVS-I-5, CAP, CD27-28, CD17, Initiation condon)进行检测。所有地中海贫血基因的检测和结果判读严格按照试剂盒说明书要求进行。
2.4. 数据统计
利用Excel 2007建立数据库，计数资料采用频数、构成比进行数据统计分析。
3. 结果
3.1. 地中海贫血基因的阳性率
在1165例地中海贫血基因检测标本中，确认检测出携带地中海贫血基因患者共186例，检出率为15.96%。其中检测出α-地中海贫血标本129例，检出率为11.07%；β-地中海贫血标本52例，检出率为4.46%；αβ-复合型地中海贫血5例，检出率为0.43%。
3.2. α-地中海贫血基因型的分布情况
在186例携带地中海贫血基因的患者标本中，检测出α-地中海贫血标本129例，包括9种(--SEA/αα, --SEA/-α3.7, --SEA/αCSα, --SEA/αWSα, -α3.7/αα, -α4.2/αα, αWSα/αα, αCSα/αα, αQSα/αα)基因型。在129例α-地中海贫血阳性标本中，主要以--SEA/αα、-α3.7/αα、-α4.2/αα、αα/αCSα和αα/αWSα为主，占α-地中海贫血的91.47%，其中以--SEA/αα基因型所占的比例最高，且比其他的基因突变类型高，其次为-α3.7/αα、-α4.2/αα，αα/αCSα和αα/αWSα，不同类型α-地中海贫血基因型及其构成比见表1。
3.3. β-地中海贫血基因型的分布情况
1165例地中海贫血基因检测标本中，检测出β-地中海贫血标本52例，主要包括CD14-15、CD17、-28、-29、CD41-42、CD43、IVS-II-654、CD71-72和CAP等9种β-地中海贫血基因突变类型，且均为杂合突变。在所检测出的52例β-地中海贫血中，主要以CD41-42、CD17、IVS-II-654、CD71-72和-28基因型为主，占比92.31，其中以CD41-42位点突变为主，共检测出24例(46.15%)，其次为CD17位点突变类型，不同类型β-地中海贫血基因突变类型及其构成比见表2。
Table 1. Mutation types and constituent ratios of α-thalassemia gene (%)
表1. α-地中海贫血基因突变类型及其构成比(%)
Table 2. Mutation types and constituent ratios of β-thalassemia gene (%)
表2. β-地中海贫血基因突变类型及其构成比(%)
3.4. α复合β地中海贫血基因突变类型分布情况
在本次地中海贫血基因统计分析中，共检测出186例阳性标本，其中检测出5例αβ复合地中海贫血基因，其地贫基因类型及构成比见表3。
Table 3. Mutation types and constituent ratios of α complex β-gene (%)
表3. αβ地中海贫血基因突变类型及构成比(%)
4. 讨论
地中海贫血是由Thomas Cooley和Pear Lee发现的一种具有遗传性的常染色体隐性的溶血性贫血，其主要以α和β-地中海贫血最为常见 [6]。α-地中海贫血分为静止型、轻型、中间型和Hb Bart’s水肿综合征，β-地中海贫血又分为轻型、中间型和重型，不同类型的地中海贫血的治疗方法存在差异。地中海贫血在全球都有分布，主要分布在东南亚地区和地中海沿岸地区，而在我国主要分布在长江以南地区，其中广西、广东、贵州和云南等省份为地贫高发地区 [4] [7] [8]。据有关报道 [9] [10] [11]，广东和广西地区地中海贫血基因的携带率较高，分别超过10%和20%，而目前国内外还没有找到有效的地贫治疗方法，因此预防中重型地贫患者出生显得特别重要。本研究主要对2021年1月至2021年6月到我院进行地中海检查的人群进行分析，为遗传咨询、优生优育和临床治疗提供参考数据。
本研究结果显示，在1165例地中海贫血基因检测标本中共检测出阳性标本186例，检出率为15.96%。其中检测出α-地中海贫血标本129例，检出率为11.07%，在阳性标本中占比为69.35%；β-地中海贫血标本52例，检出率为 4.46%，在阳性标本中占比为27.96%，且α-地中海贫血的阳性率比β-地中海贫血高，者与有关文献报道相一致 [12]。αβ-复合型地中海贫血5例，检出率为0.43%。在本次α-地中海贫血检测中主要是对常见的3种缺失型(--SEA、-α3.7和-α4.2)和3种非缺失型(αQS, αCS, αWS)基因进行检测，共检测出9种基因型，其中以--SEA/αα (52.71%)基因型最为常见，其次为-α3.7/αα (24.03%)，这与贵州、钦州和百色地区α-地中海贫血基因型分布情况相接近 [12] [13] [14]。
本研究通过对常见的17种β-地中海贫血基因位点突变进行检测，检测到52例β-地中海贫血标本，共检测出9种基因位点突变和9种不同的基因型。其中检测出CD41-42杂合子有24例，占比46.15%，检出CD17杂合子12例，占比23.08%，说明本地区主要是以CD41-42位点突变为主，其次为CD17位点突变，这与重庆地区 [15] 有一定的差别，可能是由于地域的差别和所分析的人群数量小的原因，而与吴文钦报道的文献 [16] 及英德地区 [17] 基本一致。
此外，本研究检测到α复合β地中海贫血标本5例，占总阳性标本的2.69%，虽然所占的比例不高，但如果夫妻双方都为地中海贫血基因携带者，其中一方为α复合β地中海贫血双重携带者，他们生育出重型地贫患儿的概率将有所增加，因此很有必要进行产前诊断和相关遗传咨询，为减少中重型的地贫患儿出生。
5. 结论
综上所述，通过对桂林地区地中海贫血的基因类型和分布情况进行初步分析，应加强对本地区育龄人群进行地贫相关知识的宣传及产前筛查和产前诊断，加强临床科研对地贫的研究，为本地区地中海贫血遗传咨询和预防、治疗提供参考依据。