1. 引言
红曲霉素是用红曲霉菌在大米中培养发酵而成，红曲发酵后可分离到辅酶Q10，辅酶Q10又名癸烯醌，是细胞代谢及细胞呼吸的激活剂，能改善线粒体呼吸功能，促进氧化磷酸化反应。它本身又是细胞自身产生的天然氧化剂，能抑制线粒体的过氧化，有保护生物膜结构完整性的功能。对免疫有非特异的增强作用，能提高吞噬细胞的吞噬率，增加抗体的产生，改善T细胞功能[1] [2] 。
现在饲料安全的概念在全世界范围内已成为共识,针对抗生素作为饲料添加剂的残留问题，国内外学者进行了深入的研究，期望寻找一种无污染、无残留、多功能的新型促生长剂来代替抗生素[3] 。因此，绿色饲料添加剂越来越受人们的青睐，红曲霉素作为将其运用于提升动物免疫力健康生长上必然会推动中药等添加剂在饲料行业上的推广与应用[4] [5] 。
2. 材料与方法
2.1. 试验材料
2.1.1. 试验动物
供试昆明小白鼠由延边大学医学院实验动物中心提供，引入后准备投入试验。SPF鸡4只，由延边大学医学院实验动物中心提供，于喂养试验结束当天引入备用。
2.1.2. 受试物
红曲霉素、小白鼠基础日粮由延边大学医学院实验动物中心购置。
2.1.3. 试验器材及设备
超净工作台(SW-CJ-IFD型，上海新苗医疗器械机械制造有限公司)、高压灭菌锅(SX-700型，日本TOMY公司)、高速台式离心机(Z400K型，SIGMA公司，德国)、培养箱(DNP-9082135-Ⅲ型，上海新苗医疗器械机械制造有限公司)、电子天平(FA1104N型，上海精密科学有限公司)、注射器(1 ml、5 ml)、解剖器械、鼠笼、饮水器、生理盐水、淀粉溶液、5% EDTA、吉姆萨染液、载玻片、显微镜等。
2.2. 试验方法
2.2.1. 试验动物的饲养标准
饲料为全价营养饲料，试验组的饲料成分是在标准饲料的基础上添加不同比例的红曲霉素。饲养条件为室温20℃~25℃，湿度30%~50%，动物自由进食及饮水，人工昼夜饲养管理[6] 。
2.2.2. 90 d喂养试验[7] [8]
取18~22 g小白鼠，每组40只，其中雄性15只，雌性25只，设2个剂量组(作为高低剂量组的影响比对试验)、1个对照组和1个空白组。分别在饲料中添加红曲霉素0.5% (组1)、1% (组2)，将添加剂混在基础饲料中连续给药90 d。对照组饲喂基础饲料(其中不添加任何添加剂)，在水中添加左旋咪唑0.04 g/250 g (少量激发免疫力)[9] 。
2.2.3. 观察指标
一般性指标：每天观察小白鼠的一般健康情况，采食、饮水、发病及死亡情况，记录小鼠采食量，每周称量小鼠体重。计算增重、采食量及饲料利用率。
血液以及免疫细胞指标：红白细胞计数、血红蛋白数、淋巴细胞数。
2.2.4. 吞噬细胞吞噬能力检查[10]
在饲喂90 d时，在测定吞噬细胞试验前24 h预先于小白鼠腹腔注射5%淀粉溶液1 ml后轻柔腹部，以刺激小白鼠腹腔巨噬细胞的渗出。对SPF鸡进行无菌采血(1% EDTA)，1:5生理盐水洗涤备用。采后的全血需进行离心沉淀后取悬液备用。对各组随机抽取10只小鼠进行腹腔注射，注入20%鸡红细胞悬液1 ml，轻柔腹部，计时30 min。再向受试小鼠腹腔内注射生理盐水1 ml，轻柔腹部，使腹腔液稀释。5分钟后吸取腹腔液进行涂片，置于37℃恒温箱中30 min，1:1丙酮甲醇溶液固定后进行吉姆萨染色，镜检。
2.2.5. 脏器系数测定
取肝、脾、胸腺、称重，计算脏器体重比值(脏/体 × 100)。
2.2.6. 结果分析
数据用`x ± s表示，统计软件SPSS进行分析，组间试验数据显著性差异用单因素方差分析及多组间均数两两比较，量效相关显著性差异用相关性检验分析P < 0.05表示差异有统计学意义。
3. 结果与分析
3.1. 小白鼠平均摄食量、日增重量、饲料利用率的测定
在饲料中添加0.5%、1%剂量的红曲霉中药合生元饲料饲喂小白鼠90 d后，各组动物摄食、饮水、粪便均正常，未出现中毒性临床症状。试验期间，计算各组小白鼠的平均增重、采食量及饲料利用率，结果见表1。
由表1可知，小鼠受试90 d后各试验组与对照组之间增重、采食量及饲料利用率差异均不显著(P > 0.05)，各试验组之间差异也不显著(P > 0.05)。与对照组相比，1%剂量添加组饲料利用率提高了9.89%。
3.2. 小白鼠血液指标分析
在饲料中按0.5%、1%剂量加入红曲霉与健胃中药合生素饲喂小鼠90 d，测定淋巴细胞指标，结果见表2。
由表3可知，小鼠受试90 d后，各试验组与对照组之间的红细胞计数、白细胞计数、血红蛋白及淋巴细胞数含量差异不显著(P > 0.05)，各试验组之间差异也不显著(P > 0.05)。
3.3. 小白鼠吞噬细胞指标检测
对各组随机抽取的10只小鼠进行该试验测定，得表3。
Table 1. The average food intake measurement results in mice average daily gain, feed utilization
表1. 小白鼠平均摄食量、日增重量、饲料利用率的测定结果
Table 2. Analysis results of blood parameters in mice
表2. 小白鼠血液指标分析结果
Table 3. Phagocytic index test results in mice
表3. 小白鼠吞噬细胞指标检测结果
从表3中看到实验小白鼠的腹腔巨噬细胞吞噬功能明显增高，吞噬百分率和吞噬指数均显著高于对照组(P < 0.01)，镜检时观察到实验组吞噬细胞明显增大，胞浆丰容，染色变淡，所吞噬的红细胞的消化程度级数提高。
3.4. 小白鼠脏器系数的测定
在饲料中以0.5%、1%剂量加入红曲霉素饲喂小鼠90 d，捕杀受试鼠，取主要脏器称重，测定脏器系数，结果见表4。
由表4可知，给予受试物90 d后，各试验组与对照组之间脏器系数差异不显(P > 0.05)，各试验组间差异也不显著(P > 0.05)。
4. 讨论
4.1. 对小白鼠生长性能的影响
小白鼠的生长过程中，体重的增加实际是脂肪组织的沉积，蛋白质的合成增加和全身结缔组织水分的积聚，此即中医的湿，湿盛必然导致脾失健运，只有脾的功能得到全面正常的发挥，才能使机体血脉畅通，营养物质输送到全身，特别是肌肉的生长，脾气健运则肌红润、结实。现已经受到很多学者的试验证明，孙冬岩(2007)于育肥猪饲粮中添加0.05%合生素能够促进生长，并优于抗生素组[11] 。张敏(2010)添加0.5%红曲霉合生素能够提高延边黄牛饲料表观消化率[12] 。在90 d给药喂养试验中，小鼠增重、采食量和饲料利用率的数据表明，饲料利用率、免疫器官比重0.5%组与对照组相比，均有所提高。这说明红曲霉素饲料添加剂在喂养一段时间后起到了益脾健胃促生长的性能。
Table 4. Organ coefficient of determination results in mice
表4. 小白鼠脏器系数的测定结果
4.2. 对小白鼠吞噬细胞能力的影响
巨噬细胞是机体防御功能的重要组成部分，具有特异性和非特异性的吞噬作用。正常情况下，巨噬细胞处于休止状态，活性较低，但一经激活，其形态代谢和功能均可发生显著变化。主要是膜活性增高，溶酶体和溶菌酶含量增高，杀伤病原微生物的能力增强[13] 。在90 d给药喂养试验中，各项血液指标、脏器系数均表明，各试验组与对照组之间差异不显著，各试验组之间差异也不显著，但吞噬细胞吞噬能力0.5%组与对照组相比，有所提高。这说明红曲霉素增加了巨吞噬能力。
4.3. 高剂量组(1%组)对小白鼠的影响指标
对捕杀后的动物脏器进行了肉眼观察，观察后发现，0.5%组与对照组之间未见明显异常变化，但1%组在肝脏称重时可见大部分肝脏有肿大现象，而1%组对小白鼠免疫性能的影响与0.5%组相比并未有所提高。由此可见，添加大剂量红曲霉中药合生元时可能对实质性器官造成损害。
5. 结论
该试验得出，添加少量红曲霉素可以提高饲料利用率，红曲霉素可以增强小白鼠的免疫能力。
基金项目
吉林省“十二五”重点项目(20110236)。
NOTES
*通讯作者。