1. 引言
美花石斛(Dendrobium loddigesii)为兰科多年生草本植物。在《本草经》中，石斛就已被列为上品，也是我国栽培历史悠久的兰科植物之一[1] 。作为中药有很高的药用价值。《本草纲目》中，李时珍认为石斛为“本经上品，甘、淡、微咸。主治：伤中，除脾下气，补五脏虚劳赢瘦强阴益精”[2] 。美花石斛的野生资源有限，传统的种子播种繁殖率也不高，属于我国三级濒危保护植物，自然繁殖难以大量化[3] 。目前以石斛加工而成的各类药品及滋补品走销市场，加之石斛对生长条件的苛刻，导致野生石斛遭到掠夺性的采摘，数量急剧减少。由于石斛的栽培一直存在存活率低，产量低，进入盛产期年限长的问题，因此，石斛药源一直处于紧张状态，急需解决[4] 。因此，在组培苗培养中组培苗的生根率尤为重要。本研究选择生长一致的无菌丛生芽，研究不同培养基浓度以及不同激素浓度对美花石斛的组培苗生根影响，以确定最适生根培养基配方，为下一步美花石斛组培苗的移栽成活提供基础保证。
2. 材料与方法
2.1. 实验材料
美花石斛来自贵州师范学院生物实验室经过初代、继代培养的丛生芽。
2.2. 实验方法
2.2.1. 实验材料的选择处理与接种分组
实验材料选择经过初代、继代培养的0.2~0.6 cm的丛生芽，长势基本一致。接种于各组别的培养基上。实验分组分为3个大组，没个大组设置6个不同培养基配方编号，每个培养基编号可设置15个培养瓶，一个培养瓶中接入一颗丛生芽进行诱导生根培养。
2.2.2. 培养基的配方筛选
本实验采用MS培养基为基础培养基，设置(1/4MS、1/2MS、3/4MS)一系列培养基，再添加一系列具梯度的激素(NAA)浓度(0~0.9 mg/L)。以上培养基蔗糖均为3%，琼脂均为1%。以上培养基均用0.2 mol/L的HCL或NaOH来调节PH值为5.8~6.2。培养基采用高压蒸汽灭菌，在0.1~0.15 Mpa压强(120℃~125℃)下保持15~30 min。如(表1)设置了18种不同的培养基配方，在随后每周观察并记录组培苗的生根情况以及生根数量。
2.2.3. 培养器皿
采用250 ml的玻璃培养皿，装入20 ml左右的培养基，用配套的塑料盖盖好。
2.2.4. 培养条件
组培室中培养箱培养，培养温度23℃ ± 2℃，光照强度1500~2000 lx，光周期为12/12 h。
3. 结果与分析
3.1. 以1/4MS培养基为基本培养基的不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根影响的结果分析
由表2可以看出，以1/4MS为基本培养基培养的美花石斛组培苗生长情况不是很理想，且生根率也不是较高，平均根数从1.1到2.2，根平均长度从0.6 cm到1.41 cm。生根率随着激素(NAA)的浓度增加而上升，但当激素浓度到达0.9 mg/L时，叶芽出现枯黄，表明最适NAA浓度在0.7 mg/L时到达峰值。
3.2. 以1/2MS培养基为基本培养基的不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根影响的结果分析
由表3可以看出，1/2MS培养基对美花石斛组培苗的生根有显著的影响，生根率也比较理想，随着激素(NAA)浓度的增加，美花石斛组培苗的生根数量与生根率越来越好，在NAA浓度为0.7 mg/L时，组培苗平均根数为3.9颗，根平均长度为4.55，生根率为86%，生长状况较好。随着NAA浓度的继续增加，到达0.9 mg/L时，虽然生根率等一系列指标比较理想，但组培苗叶面枯黄，不是实验的理想结果。因此，以1/2MS为基本培养基的最适激素(NAA)浓度为0.7 mg/L。
3.3. 以3/4MS培养基为基本培养基的不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根影响的结果分析
由表4可以看出，以3/4MS为基本培养基对美花石斛组培苗的影响较1/4MS，1/2MS培养基更加不是理想，整个美花石斛组培苗生长缓慢，长出的根即细小又短小，长出的根的平均长度、平均根数都比较不为理想。不能符合移栽使用。整个生根率也很差，同样有个问题为当NAA浓度达到0.9 mg/L时，组培苗的叶、芽会出现枯黄情况。
3.4. 实验结果总论
通过以上三种MS (1/4MS、1/2MS、3/4MS)培养基以及不同激素(NAA)浓度的不同对美花石斛组培苗进行分组培养，一周后均出现白点生根。但在3周过后，生长以及生根情况出现明显的差异。在一定条件下，低浓度的无机盐对美花石斛组培苗的生长有促进作用，激素(NAA)随浓度的增加对美花石斛组培苗生根有促进作用。以1/2MS + 0.7 mg/L NAA为最佳培养基，此时，美花石斛组培苗的平均根数、根平均长度以及生根率都是最好的。
4. 讨论
我国石斛组培研究起步较晚，直到1984年，徐云鹘等[5] 首报道获得霍山石斛试管苗随后对石斛资源，生物学特性，进行组织培养及栽培驯化等方面进行了大量的研究。2004年以卢文芸[6] 等人以美花石斛的茎段作为外植体进行培养，通过形成丛生芽的形式快速繁殖试管苗，改变了过去通过原球茎途径进行繁殖的方式，简化了操作步骤。美花石斛对生长环境的要求比较苛刻，在工厂化生产讨论结果也只有53.6%。2012年，云南省德宏热带农业科学研究所[7] ，研究的以美花种子无菌播种繁殖技术也没有得到较大的收益。说明终止的繁殖对于石斛的培养是得不到较好的发展。石斛为合轴生长(sym- podial)，分株是人工繁殖的主要形式，故繁殖系数低，且在通常情况下生长慢，成为发展较慢的主要原
Table 1. 18 kinds of culture medium formulas
表1. 18种培养基配方
Table 2. 1/4MS: the effects of NAA in different concentrations on Dendrobium loddigesii Rolfe root culture
表2. 1/4MS：不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根的影响
因[8] 。
5. 结论
美花石斛组培苗适宜的生根培养基为1/2MS + 0.7 mg/L NAA。培养基蔗糖、琼脂加入量分别为3%、1%，适宜的培养基PH为5.8，适宜光照强度为2000 lx，适宜光周期为12/12 h。培育出的组培苗生长健壮，生根数较好，生根率最高，可进行移栽。
Table 3. 1/2MS: the effects of NAA in different concentrations on Dendrobium loddigesii Rolfe root culture
表3. 1/2MS：不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根的影响
Table 4. 3/4MS: the effects of NAA in different concentrations on Dendrobium loddigesii Rolfe root culture
表4. 3/4MS：不同激素(NAA)浓度对美花石斛组培苗生根的影响
基金项目
贵州省科技厅项目(黔科合J字[2013]2246号)；贵州师范学院博士启动基金项目(12BS028)。