1. 引言
肾上腺素β1受体阻断药主要用于处理高血压冠心病以及心律失常等 [1] [2] [3] 。目前，上市的超短效β1受体阻断剂仅有2个，第一个超短β1受体阻断剂由American Critical Care研制开发的艾司洛尔(Esmolol)，除了可以降低心率外，大剂量艾司洛尔还可降低血压，但是艾司洛尔活性较低 [4] [5] [6] 。第二种是2002年在美国上市盐酸兰地洛尔(Landiolol Hydrochloride)是由日本小野制药工业株式会社研制开发的新型超短效β1受体阻断药 [7] [8] [9] 。该药具有更高的心脏选择性，主要用于手术时心动过速、心房纤维性颤动、心房扑动的治疗 [10] [11] [12] [13] 。盐酸兰地洛尔基因毒性杂质是指在原料药或辅料的生产中，以及在制剂制备过程中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机物 [14] [15] [16] 。建立科学的分析方法有助于保证药品生产环境的质量控制。目前关于盐酸兰地洛尔中的3-硝基苯磺酸甲酯和3-硝基苯磺酸乙酯杂质的分析方法未见报到。本文采用气相色谱-串联四级杆质谱法建立了盐酸兰地洛尔中的3-硝基苯磺酸甲酯和3-硝基苯磺酸乙酯杂质的分析方法。
2. 实验部分
检测条件及样品处理
本实验运用Agilent 7890A-7000B (GC-QQQ)气相色谱-串联四极级杆质谱仪；气相色谱条件：色谱柱为HP-5ms (30 m × 250 µm × 0.25 µm)，柱温箱升温程序为：50℃以10℃/min升至220℃保持1 min，再以每分钟30℃升至280℃保持5 min。进样口温度300℃。采用脉冲不分流进样模式。载气使用高纯氦气，流速为1.0 mL/min。进样体积为1.0 μL。
质谱条件：采集模式用多反应监测(MRM)模式；离子源温度为230℃。各杂质组分质谱定量/定性离子见表1。
配制储备溶液：稀释溶剂使用色谱级N,N-二甲基甲酰胺。
对照品溶液：精密称定3-硝基苯磺酸甲酯标样(辰欣药业股份有限公司提供，批号：20140914) 10.2 mg，置10 mL棕色容量瓶中，N,N-二甲基甲酰胺稀释定容，得1.02 mg/mL标准溶液；精密称定3-硝基苯磺酸
Table 1. Mass parameters of 3-sulfonic acid methyl ester and 3-sulfonic acid ethyl ester
表1. 3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的质谱参数
乙酯标样(辰欣药业股份有限公司提供，批号：20140915) 10.1 mg，置10 mL棕色容量瓶中，N,N-二甲基甲酰胺稀释定容，得1.01 mg/mL标准溶液。各精密量取上述储备液标准溶液各1.0 mL置于10 mL容量瓶中，N,N-二甲基甲酰胺稀释至刻度，摇匀后得100 µg/mL混合标准储备溶液A。
供试品溶液：取盐酸兰地洛尔试样约300 mg，精密称定，置于10 mL棕色容量瓶中，N,N-二甲基甲酰胺稀释定容，摇匀后超声5分钟，作为供试品溶液待测。
3. 结果与讨论
3.1. 专属性实验
1) 空白溶剂：N,N-二甲基甲酰胺，待测。
2) 空白样品溶液：精密称定空白样品300.1 mg，置10 mL量瓶中，N,N-二甲基甲酰胺稀释定容，作为空白样品溶液，待测。
3) 3-硝基苯磺酸甲酯定位溶液：直接取浓度为1 mg/mL的3-硝基苯磺酸甲酯标准溶液1.0 mL于1.5 mL安捷伦进样瓶中，待测。
4) 3-硝基苯磺酸乙酯定位溶液：直接取浓度为1 mg/mL的3-硝基苯磺酸乙酯标准溶液1.0 mL于1.5 mL安捷伦进样瓶中，待测。
5) 空白样品加混标溶液：准确称取盐酸兰地洛尔样品300 mg，置于10 mL容量瓶中，准确加入浓度为100 µg/mL的标准溶液1.0 mL，稀释定容。摇匀后超声5分钟，作为空白样品加标溶液，待测。
分别精密量取上述溶液各1.0 µL注入气相色谱串联质谱联用仪，记录总离子流图，结果见表2。
3.2. 线性范围、定量限及检出限
取3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯对照品溶液A适量，逐级稀释配置成浓度分别为1.0 µg/mL (对照品溶液B)、0.5 µg/mL (对照品溶液C)、0.2 µg/mL (对照品溶液D)、0.1 µg/mL (对照品溶液E)、0.05 µg/mL (对照品溶液F)的3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯混合标准曲线溶液。相同方法，分别配制三条线性混合标准曲线溶液。
精密量取上述溶液各1.0 µL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪，记录峰面积。以目标物杂质浓度为横坐标，以相应目标物峰面积为纵坐标做回归曲线，三条线性平均值计算回归方程及相应的线性回归系数。线性关系良好，相关系数均大于0.99。分别精密量取浓度为1.0 mg/mL的对照品储备液，逐级稀释各对
照品储备液，逐级精密量取稀释后溶液1.0 µL，上机分析，当对照品浓度稀释至其信噪比(S/N)约在10~15左右时即为仪器定量限，其信噪比(S/N)约在3~5时左右即为仪器检出限。以称取0.3 g样品计定容至10 mL计方法检出限、定量限。结果见表3。
3.3. 方法精密度及准确度试验
由于样品中未检出各杂质，取盐酸兰地洛尔样品300.0 mg，置10 mL量瓶中，精确加入对照品溶液A，稀释配制浓度为0.2 µg/ml试品溶液，平行测定6次，计算RSD%，结果见表4。方法精密度相对标准偏差在1.5%~3.0%之间，精密度良好。
空白样品溶液：精密称定盐酸兰地洛尔样品300.0 mg，置于10 mL量瓶中，加稀释溶剂至刻度，摇匀后超声5分钟，作为空白样品溶液。平行制备3份。
加样回收率试验溶液：精密称定盐酸兰地洛尔样品300.0 mg，分别置于10 mL量瓶中，分别加入混标对照品溶液A，稀释配制浓度为0.2 µg/mL及0.5 µg/mL的加样回收率试验溶液。每个浓度平行制备3份。
精密量取上述供试品溶液1.0 µL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪，记录离子流图。结果见表5。可以看出样品在两个加标浓度水平下准确度均在95.0%~110.0%之间，准确度良好。
3.4. 溶液稳定性实验
1) 对照品溶液稳定性
制备浓度为200 ng/mL的对照品溶液，分别于室温放置0小时、2小时、4小时、8小时和12小时、24小时，精密量取1.0 μL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪，记录各杂质的峰面积。结果见表6。
2) 供试品溶液稳定性
由于样品溶液中无目标物检出，两种化合物存在不同程度的不稳定性，所以设定考察5个小时内3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的稳定性。参照样品加标溶液的制备方法制备一份200 ng/mL的加标溶液，分别于室温放置0小时、1小时、2小时、3小时和4小时、5小时，精密量取1.0 μL注入气相色谱-串联四级杆质谱仪，记录各杂质的离子流图，结果见表6。由表可以看出，对照品溶液在室温放置下3-硝基苯磺酸甲酯8个小时内衰减不明显，24小时后衰减25.9%；3-硝基苯磺酸乙酯衰减较慢，24小时后衰减7.29%。两种化合物均存在不同程度的不稳定性，实验过程中应现用现配。
3.5. 实际样品测定
取待测盐酸兰地洛尔试样3批，按上述方法检测，每批样品平行测定3次，测定结果见表7。标准样品总离子流色谱图见图1所示。
4. 结论
采用气相色谱-串联四级杆质谱法多反应监测模式测定盐酸兰地洛尔杂质3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基
Table 3. Linear range, regression equation, limit of detection and limit of quantitation
表3. 线性范围、回归方程、检出限及定量限
Table 6. Stability of the solution
表6. 溶液稳定性试验
Figure 1. Chromatogram of 3-sulfonic acid methyl ester and 3-sulfonic acid ethyl ester
图1. 3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的色谱图
苯磺酸乙酯，方法检出限分别为1 μg/mL、0.8 μg/mL，仪器限检出限分别为30 ng/mL、25 ng/mL在0.05~1 μg/mL的线性范围内，线性关系良好，该方法精密度在1.5%~3.0%之间，溶液稳定性良好，该方法可以用于盐酸兰地洛尔杂质3-硝基苯磺酸甲酯、3-硝基苯磺酸乙酯的检测。
基金项目
山东省自然科学基金(批准号：ZR2012BQ009)。
*通讯作者。