HJFNS  >> Vol. 8 No. 4 (November 2019)

    蛹虫草中抗肿瘤活性成分及作用机制研究进展
    Research Progress on Anti-Tumor Active Ingredients and Anti-Tumor Mechanism of Cordyceps militaris

  • 全文下载: PDF(733KB) HTML   XML   PP.258-266   DOI: 10.12677/HJFNS.2019.84034  
  • 下载量: 90  浏览量: 121  

作者:  

项 婷,夏 琛,沈建福:浙江大学生物系统工程与食品科学学院,天然产物与人类健康研究中心,浙江 杭州;
王超然:中国科学院大连化学物理研究所,辽宁 大连;中科院大化所中国医药城生物医药创新研究院,江苏 泰州

关键词:
蛹虫草生物活性成分细胞凋亡细胞周期免疫调节耐药性细胞敏感性Cordyceps militaris Biological Active Ingredients Apoptosis Cell Cycle Immune Regulation Drug-Resistant Cell Sensitivity

摘要:

蛹虫草作为宝贵的生物资源,在抗肿瘤领域具有一定的食药用价值。本文首先对蛹虫草中具有抗肿瘤作用的活性成分进行整理,例如虫草多糖类物质、核苷类物质、蛋白质类物质以及甾醇类物质等。其次,根据蛹虫草的广谱抗肿瘤作用,对其直接或间接的抗肿瘤作用机制进行分类汇总,主要包含抑制嘌呤、DNA和RNA生物合成及蛋白质翻译、诱导肿瘤细胞凋亡、调控细胞周期、抗肿瘤细胞转移和侵袭、改善免疫调节、增强耐药性细胞的敏感性等。最后,在总结前人研究的基础上,提出了未来在蛹虫草抗肿瘤作用的研究中可能值得继续深入探讨的重点,为蛹虫草抗肿瘤的研究开拓思路。

As a valuable biological resource, Cordyceps militaris has certain medicinal value in the field of an-ti-tumor. This article firstly organizes the active ingredients with anti-tumor effects in Cordyceps militaris, such as cordyceps polysaccharides, nucleosides, proteinaceous substances and sterols. Secondly, according to the broad-spectrum anti-tumor effect of Cordyceps militaris, its direct or indirect anti-tumor mechanism is classified and summarized, including inhibition of sputum, DNA and RNA biosynthesis and protein translation, induction of tumor cell apoptosis, regulation of cell cycle, inhibition of tumor cell metastasis and invasion, improvement of immune regulation, en-hancement of sensitivity of drug-resistant cells, and the like. Finally, on the basis of summarizing the previous studies, the paper puts forward the focus of future research on the anti-tumor effect of Cordyceps militaris, and explores the research on anti-tumor of Cordyceps militaris.

1. 引言

蛹虫草(Cordyceps militaris (L.) Link),又名北虫草、北冬虫夏草,天然的蛹虫草是经蛹虫草菌侵染昆虫蛹后所形成的实体,隶属于真菌门(Eumycota)、子囊菌门(Ascomycota)、子囊菌亚门(Ascomycotinia)、粪壳菌纲(Sordariomycetes)、肉座菌亚纲(Hypocreomycetidae)、肉座菌目(Hypocreales)、虫草科(Cordycipitaceae)、虫草属(Cordyceps) [1],是虫草属真菌的模式种。早在1986年,中科院就已经实现了蛹虫草的人工培育 [2]。相比于野生型冬虫夏草,人工培育的蛹虫草因具有相同的活性成分和相似的生物学功效 [3],已逐渐成为冬虫夏草良好的替代品。

蛹虫草子实体和菌丝体的抗肿瘤作用已被大量文献所报道,相比于放疗、化疗等传统的治疗恶性肿瘤的方法,蛹虫草作为一种天然的抗肿瘤药物,具有安全、副作用小等优点。早于1997年,美国NCI就把虫草素引入18种抗癌新药进行开发研究,并与国家癌症研究所波士顿医学中心(BMC)的教授们共同证实了虫草素对白血病具有很好的药物疗效,目前,以虫草素为主要成分的核苷类新药已进入三期临床 [4]。因其具有广谱的抗肿瘤活性,蛹虫草的应用开发前景极为广泛。本文根据前人的研究成果,对蛹虫草中具有抗肿瘤作用的活性成分进行了系统性的分类和整理,并综述了抗肿瘤的作用机制,为今后更深入地发掘蛹虫草的食药用价值作参考。

2. 蛹虫草中抗肿瘤活性成分

2.1. 核苷类

蛹虫草中核苷类物质的抗肿瘤活性一直是研究的热点,通过MTT法和SRB法检测,发现蛹虫草中核苷类物质对人表皮鳞癌细胞A431、人直肠癌细胞HT-29、人胃癌细胞HGC-27、人恶性黑色素瘤细胞A-375、人急性淋巴白血病细胞CCRF-CCEM、人肺癌细胞NCI-H292、人红白血病细胞K562、人肝癌细胞HepG2、人宫颈癌细胞HeLa、人胃癌细胞MGC80-3、人大细胞肺癌细胞NCI-H460、人乳腺癌细胞MCF-7、人非小细胞肺癌细胞A549以及人肾癌细胞A498均具有体外抑制作用,证明蛹虫草中核苷类物质具有广谱的抗肿瘤作用 [5]。

虫草素(Cordycepin),即3’-脱氧腺苷,最初于1950年从蛹虫草的培养滤液中分离发现所得 [6]。大量研究证明虫草素对肝癌、肺癌、乳腺癌、大肠癌、结肠癌、鼻咽癌、甲状腺癌、子宫癌等都具有良好的抑制作用。近年来,王成树等人完整地解析了虫草素在蛹虫草中的生物合成机理,并从基因及化合物水平证明野生型冬虫夏草中不含虫草素 [7]。除虫草素外,研究人员通过高效液相分析建立了蛹虫草中另外15种核苷类物质的指纹图谱,如图1所示 [8] [9]。

Figure 1. Chromatography profile of nucleoside standard product (A) and sample of Cordyceps militaris (B). 1: Cytosine; 2: Uracil; 3: Cytidine; 4: Hypoxanthine; 5: Xanthine; 6: Uridine; 7: Thymine; 8: Adenine; 9: Inosine; 10: Guanosine; 11: 2’-deoxy guanosine; 12: Thymidine; 13: Adenosine; 14: 2’-deoxy adenosine; 15: Cordycepin; 16: N6-(2-hydroxyethyl)-adenosine

图1. 核苷标准品(A)和蛹虫草样品(B)色谱图 1:胞嘧啶;2:尿嘧啶;3:胞苷;4:次黄嘌呤;5:黄嘌呤;6:尿苷;7:胸腺嘧啶;8:腺嘌呤;9:肌苷;10:鸟苷;11:2’-脱氧鸟苷;12:胸苷;13:腺苷;14:2’-脱氧腺苷;15:虫草素;16:N6-(2-羟乙基)腺苷

2.2. 虫草多糖类

虫草多糖含量较高,存在于蛹虫草菌丝体、蛹虫草子实体、液体深层发酵液以及人工固态培养基中,可通过水提法、超声波辅助提取法、酶解法和超临界流体法提取 [10]。虫草多糖类物质结构复杂,通常由多个单糖聚合而成,其生物活性与分子量大小、化学结构、糖苷键、骨架长度、聚合度、分支度以及三维结构密切相关。

黄奕诚等人经水提醇沉、硫酸锌盐去蛋白、膜过滤、DEAE-52柱层析及Sephadex G-100进一步层析从蛹虫草子实体中得到多糖组分CP2-c2-s2 [11]。任大明等人从蛹虫草固体发酵培养基中分离纯化得到多糖CMMSP1,并经红外光谱分析其单糖组成和结构 [12]。文献 [13] [14] [15] 中,研究人员从蛹虫草中分离并鉴定出六种多糖(CPS-1、CPS-2、CPS-3、P50-1、P70-1和P70-2),经体外抗氧化实验发现P70-1具有清除羟自由基的活性,IC50值为0.548 mg/ml。目前,经报道的蛹虫草多糖还包括W-CBP50 [16] 、MCMP [17] 、CMP-W1和CMP-S1 [18] 等。蛹虫草多糖不仅能够直接抑制肿瘤细胞增殖、诱导凋亡,还能通过调节免疫系统,间接抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。

2.3. 虫草甾醇类

迄今,已从蛹虫草中分离鉴定出约10种甾醇及其衍生物,包含麦角甾醇、麦角甾醇过氧化物、胆固醇、β-谷甾醇、胡萝卜苷、菜油甾醇、二氢菜籽甾醇、7-啤酒甾醇、麦角甾-7,22-二烯-3β,5α,6β-三醇、5,8-表二氧麦角甾烷-6,22-二烯-3-醇等 [19]。其中,麦角甾醇作为VD2的前体物质,是真菌细胞膜的重要组成物质,经证明具有抗肿瘤作用 [20]。

2.4. 蛋白质和多肽

蛹虫草免疫调节蛋白(C. militaris immunoregulatory protein, CMIP)能够抑制4T1乳腺癌细胞的体内肺转移 [21]。蛹虫草蛋白(C. militaris protein, CMP),经体外研究证明对人乳腺癌和膀胱癌具有细胞毒性作用 [22]。文献 [23] 中研究人员从真菌粗提物中分离到两种新的多肽:环五肽F (1)和环五肽G (2),以及三种已知的环肽:环肽A(3)、环肽C(4)和双硫基(甲硫基)透明质酸(5),其结构详见图2。其中环五肽F和G被证明对Hela和MCF7细胞系具有细胞毒性作用。文献 [24] 中从冬虫夏草菌丝提取物BCC 16173中分离得到的蛹虫草多肽A (Cordyheptapeptide A)和一种新的蛹虫草多肽B (Cordyheptapeptide B),具有抗癌和增强免疫作用。

Figure 2. Structural formula of Cycloaspeptides F (1), G (2), cycloaspeptides A (3), C (4), and bisdethiodi(methylthio)hyalodendrin (5)

图2. 环五肽F(1)、G(2)、环肽A(3)、C(4)及双硫基(甲硫基)透明质酸(5)的结构式

2.5. 酶类

蛹虫草中存在超氧化物歧化酶(SOD) [25]。SOD作为一种抗氧化酶,具有清除氧自由基的作用,可避免氧化应激反应诱导的DNA损伤及其对细胞信号传导的干扰,在肿瘤细胞的发生和发展过程中起重要作用 [26]。

2.6. 黄酮类

黄酮类化合物能够促进肿瘤细胞凋亡,同时延缓正常组织的凋亡。Choi等人在研究蛹虫草栽培发芽大豆的代谢组学过程中发现四种新型的异黄酮葡萄糖苷 [27]。Kim等人研究发现glycitein 7-O-beta-d-Glucoside 4''-O-methylate (CGLM)能通过阻断NF-kappa-B和p38/ERK MAPK途径,下调COX-2、MMP-9和MUC5AC基因表达,使NCI-H292细胞免受表皮生长因子(EGF)诱导的损伤 [28]。

3. 蛹虫草的抗肿瘤机制研究

3.1. 直接抗肿瘤作用

3.1.1. 抑制嘌呤生物合成,DNA和RNA生物合成及蛋白质翻译

进入细胞后,虫草素依次被磷酸化为5’单磷酸盐、5’二磷酸盐和5’三磷酸盐,磷酸化后的虫草素能抑制核糖磷酸焦磷酸激酶和5’-磷酸核糖焦磷酸转移酶活性,从而抑制嘌呤的合成,进而抑制肿瘤细胞DNA合成 [29] [30] [31]。在RNA合成的转录过程中,虫草素作为腺苷结构类似物可代替正常的核苷,提前终止转录过程 [32]。虫草素通过抑制核酸和蛋白质的合成,切断肿瘤细胞增殖和生存所必需的代谢途径,是目前虫草素的抗肿瘤作用机制中研究较早的一种。

3.1.2. 诱导肿瘤细胞凋亡

细胞凋亡是由基因控制的一种自主有序的死亡方式,它一系列相关基因的激活、表达和调控。与虫草素诱导肿瘤细胞凋亡相关的信号通路主要有NF-κB信号通路、丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)信号通路、PI3K/Akt信号通路等。另外,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族(caspase)和Bcl蛋白在体外诱导肿瘤细胞凋亡过程中具有重要作用。

通过流式细胞仪检测发现一种新型虫草多糖CSPS-1在浓度为150、300 g/mL时对S-180细胞的凋亡率分别比5-Fu组高3.96%和53.17% [33]。虫草素可增强c-Jun氨基端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)蛋白激酶和p38蛋白激酶活性,上调Bcl-2家族中促凋亡蛋白Bax的表达 [34]。Bax蛋白的过表达,通常会引起线粒体中细胞色素C的释放,从而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8 (caspase 8)启动凋亡,激活下游凋亡执行因子,释放半胱天冬氨酸蛋白酶3 (caspase 3),最终致使肿瘤细胞凋亡。

3.1.3. 调控细胞周期

细胞周期紊乱会导致正常细胞的癌变以及恶性肿瘤细胞的无限增殖,如何调控恶性肿瘤的细胞周期是研究开发抗癌新药的一大重点。细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinases, CDKs)是目前研究的热点,它可以在细胞周期的不同阶段被相应的细胞周期蛋白(cyclins)所激活,在细胞周期的调控过程中起着关键性作用。

虫草素可上调p21WAF1基因表达,抑制细胞周期蛋白复合体(cyclin B1/CDC2)的表达,导致细胞周期阻滞于G2/M期,最终抑制结肠癌细胞增殖 [35]。在研究血管平滑肌时发现,虫草素通过Ras细胞外调节蛋白激酶1 (extracellular regulated protein kinases 1, ERK1)信号通路上调p27KIP1基因,抑制细胞周期蛋白复合体(cyclin E/CDK2)表达,导致细胞周期阻滞于G1/S期 [36]。另外,在抑制白血病细胞生长的过程中,虫草素还可以通过促进p53蛋白的增加来抑制cyclin A2、cyclin E、CDK2的表达,从而影响细胞周期蛋白复合体的形成,最终造成S期的阻滞 [37]。

虫草多糖(CSP),以12.5 mg/kg体重处理S180腹水癌细胞荷瘤小鼠,结果表明其能明显抑制S180移植性实体瘤的生长,并降低小鼠S180腹水瘤细胞的分裂指数,通过影响细胞周期,阻止细胞分裂从而抑制肿瘤细胞 [38]。柞蚕蛹虫草水提物处理人乳腺癌细胞MCF-772h后,发现G0-G1(DNA合成前期)的比例增加,细胞周期阻滞 [39]。

3.1.4. 抗肿瘤细胞转移和侵袭

癌细胞离开原病灶转移侵机体其他部位,需要通过细胞外基质(extracellular matrix, ECM),基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases, MMPs)在癌细胞的转移和侵袭过程中起着重要的作用。

Akt信号通路和ERK1/2信号通路是肿瘤细胞研究中的经典信号通路,研究表明,虫草素可明显下调胆囊癌细胞中Akt、ERK1/2以及两者间信号因子Ezrin的磷酸化水平,从而抑制细胞迁移 [40]。新型水溶性多糖CME-1能够下调MMP-1的表达水平,减少细胞外信号调节激酶(ERK1/2和p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK))的磷酸化,恢复黑色素瘤细B16-F10细胞对IkB-α的降解,从而抑制黑色素瘤细胞B16-F10的转移,且呈剂量依赖关系 [41]。另外,虫草素可以通过MAPK、NF-κB和PI3K/Akt等信号通路干预基质金属蛋白酶,通过下调MMP家族中的MMP-2和MMP-9,降解IV型胶原蛋白,增强脑肿瘤、膀胱癌、乳腺癌和前列腺癌的转移和侵袭能力 [42]。与抑制肿瘤细胞增殖和促进肿瘤细胞凋亡相比较,我们发现蛹虫草中的活性物质在抗肿瘤转移和侵袭方面的分子基础研究相对较少,关键位点的上下游信号分子以及直接或间接的作用仍有待进一步研究。

3.2. 间接抗肿瘤作用

3.2.1. 免疫调节机制

T细胞受体(TCR)表面可表达辅助性T细胞(Helper T cells,Th,CD4+细胞)和细胞毒性T细胞(Cytotoxic T cells,Tc,CD8+细胞)。CD4+细胞可分化为不同的亚群,每个亚群释放特定的细胞因子,例如Th1释放TNF-α (肿瘤坏死因子)、IFN-γ (interferon-γ,干扰素γ)和IL-2 [43]。TNF-α可直接诱导肿瘤细胞凋亡,IFN-γ可以活化巨噬细胞,增强其吞噬病原体功能,以及IL-2则可增强NK细胞的杀伤作用 [44]。

研究 [44] 发现,虫草多糖可明显抑制荷瘤小鼠S180肉瘤的生长,提高免疫器官指数,诱导T淋巴细胞转化、增殖,增加细胞CD4+CD8-亚群数量,并通过上调细胞因子TNF-α和IL-2的水平,改善机体免疫功能,增强机体抗肿瘤作用。迟发型变态反应(DTH)是T细胞介导的炎症反应,依赖于细胞免疫的反应,虫草菌丝体多糖能够增强DTH反应,增加外周血α-萘酯酶阳性细胞的数目,通过激活T淋巴细胞,释放相应的细胞因子对肿瘤细胞产生直接的杀伤作用,从而抑制肿瘤细胞的生长 [45]。

3.2.2. 增强耐药性细胞的敏感性

5-Fu具有广谱的抗肿瘤作用,常用作抗肿瘤实验的阳性对照药物,适用于消化道癌(口腔鳞状细胞癌、食管癌、胃癌、肝癌、胰腺癌、结直肠癌等 [46] [47] [48] [49] [50] )、肺癌 [51] 、卵巢癌、乳腺癌 [52] 、宫颈癌、膀胱癌、头颈部癌 [53] 等。它在细胞内以伪代谢物的形式干扰蛋白质的合成,或转变成5-氟尿嘧啶脱氧核苷酸,从而抑制脱氧胸苷酸合成酶的作用,阻止脱氧尿苷酸甲基化成为脱氧胸苷酸,最终影响DNA的合成。增强肿瘤细胞对5-Fu药物治疗的敏感性,降低肿瘤细胞的耐药性是癌症治疗中的一大难点。

以药物耐受模型K562细胞为研究对象,发现虫草素与INF-α或5-Fu联用时,能够通过抑制Poly(A)多聚酶(PAP)的活性,从而提高耐受化疗药物的K562细胞对凋亡的敏感性 [54]。蛹虫草小分子肽在一定浓度范围内,能够提高胃癌细胞株SGC-7901对5-Fu化疗的敏感性,且具有剂量依赖性 [55]。由此可见,蛹虫草中活性物质与常用的化疗药物联用,可作为探究天然活性物质抗肿瘤效果的方法之一。

4. 结论与展望

“十二五”提出了“珍稀药用生物替代品规模化关键技术研究与产品开发”,努力开展虫草素抗肿瘤的临床前研究,该目标的提出推进了蛹虫草在抗肿瘤领域的药用价值。

目前,针对蛹虫草抗肿瘤作用的研究仍然存在许多不足,未来的研究方向和值得深入研究的,笔者认为主要有以下几点:① 作为一种人工发酵的真菌,蛹虫草在发酵过程中所使用的培养基或者发酵液的不同,会导致其菌丝体和子实体等部位所含的活性物质种类以及含量上的差异,如何确立一种优良的分析方法,从而建立蛹虫草的指纹图谱这一问题亟待解决。② 在生物学功效方面,研究人员关注最多的仍然是虫草素、虫草多糖类物质,而其他可能的活性成分并没有得到足够的重视。因此,在指纹图谱建立的基础上,可以尝试尽可能的挖掘蛹虫草中新型的活性物质。③ 在蛹虫草抗肿瘤作用机理的研究中,目前仍然仅侧重于测定某几个关键基因的表达水平,而未能准确定位关键基因的上下游信号。因此,基因沉默、基因敲除等技术应更多地运用,以便于更加完整地描绘出整个信号通路,为癌症的治疗开发新思路。相比于放疗、化疗等传统的治疗恶性肿瘤的方法,蛹虫草作为一种天然的抗肿瘤药物,具有安全、副作用小等特点,未来更深入地探究其抗肿瘤作用的机制,才更有利于发挥其食药用价值。

NOTES

*通讯作者。

文章引用:
项婷, 夏琛, 沈建福, 王超然. 蛹虫草中抗肿瘤活性成分及作用机制研究进展[J]. 食品与营养科学, 2019, 8(4): 258-266. https://doi.org/10.12677/HJFNS.2019.84034

参考文献

[1] 黄年来, 林志彬, 陈国良, 等. 中国食药用菌学[M]. 上海: 上海科学技术文献出版社, 2010: 1763.
[2] 高凌飞, 王义祥, 翁伯琦. 蛹虫草工厂化栽培与系列加工技术研究进展[J]. 中国农学通报, 2014, 30(13): 93-101.
[3] 杨昕, 斯陆勤, 涂秩平, 等. 不同产地人工蛹虫草子实体及冬虫夏草中核苷类成分的比较[J]. 医药导报, 2009, 28(10): 1354-1356.
[4] Nakamura, K., Shinozuka, K. and Yoshikawa, N. (2015) Anticancer and Antimetastatic Effects of Cordycepin, an Active Component of Ophiocordyceps sinensis. Journal of Pharmacological Sciences, 127, 53-56.
https://doi.org/10.1016/j.jphs.2014.09.001
[5] 周云, 韩重, 杨威, 等. 蛹虫草核苷体外抗肿瘤实验研究[J]. 今日药学, 2015, 25(4): 233-235+246.
[6] Cunningham, K.G., Manson, W., Spring, F.S., et al. (1950) Cordycepin, a Metabolic Product Isolated from Cultures of Cordyceps militaris (Linn.) Link. Nature, 166, 949-949.
https://doi.org/10.1038/166949a0
[7] Xia, Y.L., Luo, F.F., Shang, Y.F., et al. (2017) Fungal Cordycepin Bio-synthesis Is Coupled with the Production of the Safeguard Molecule Pentostatin. Cell Chemical Biology, 24, 1479-1489.
https://doi.org/10.1016/j.chembiol.2017.09.001
[8] 樊慧婷, 林洪生. 蛹虫草化学成分及药理作用研究进展[J]. 中国中药杂志, 2013, 38(15): 2549-2552.
[9] 朱丽娜, 刘艳芳, 张红霞, 等. 不同来源的蛹虫草子实体活性成分的比较[J]. 菌物学报, 2018, 37(12): 1695-1706.
[10] 周国海, 张泳, 赵立超, 等. 蛹虫草多糖提取纯化工艺研究[J]. 食品与机械, 2014, 30(5): 220-224.
[11] 黄奕诚, 陈雪香, 贺丽苹, 等. 蛹虫草多糖的纯化及其分子量的测定[J]. 现代食品科技, 2012, 28(8): 1054-1057.
[12] 任大明, 李冬琦, 劳云云. 蛹虫草固体发酵培养基多糖的分离纯化及组成分析[J]. 食品工业科技, 2010, 31(10): 121-123.
[13] Yu, R.M., Song, L.Y., Zhao, Y., et al. (2004) Isolation and Biological Properties of Polysaccharide CPS-1 from Cultured Cordyceps militaris. Fitoterapia, 75, 465-472.
https://doi.org/10.1016/j.fitote.2004.04.003
[14] Yu, R.M., Wang, L., Zhang, H., et al. (2004) Isolation, Purification and Identification of Polysaccharides from Cultured Cordyceps militaris. Fitoterapia, 75, 662-666.
https://doi.org/10.1016/j.fitote.2004.06.010
[15] Yu, R.M., Wang, L., Song, L.Y., et al. (2007) Structural Cha-racterization and Antioxidant Activity of a Polysaccharide from the Fruiting Bodies of Cultured Cordyceps militaris. Carbohydrate Polymers, 70, 430-436.
https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2007.05.005
[16] Chen, X.L., Wu, G.H. and Huang, Z.L. (2013) Structural Analysis and Antioxidant Activities of Polysaccharides from Cultured Cordyceps militaris. International Journal of Biological Macromolecules, 58, 18-22.
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2013.03.041
[17] Zhang, A.L., Lu, J.H., Zhang, N., et al. (2010) Extraction, Purification and Anti-Tumor Activity of Polysaccharide from Mycelium of Mutant Cordyceps militaris. Chemical Re-search in Chinese Universities, 26, 798-802.
[18] Lou, X.P., Duan, Y.Q., Yang, W.Y., et al. (2017) Structural Eluci-dation and Immunostimulatory Activity of Polysaccharide Isolated by Subcritical Water Extraction from Cordyceps militaris. Carbohydrate Polymers, 157, 794-802.
https://doi.org/10.1016/j.carbpol.2016.10.066
[19] 左锦辉, 贡晓燕, 董银卯, 等. 蛹虫草的活性成分和药理作用及其应用研究进展[J]. 食品科学, 2018, 39(21): 330-339.
[20] 孟泽彬, 陈林会, 韩近雨, 等. 蛹虫草化学活性成分的研究进展[J]. 分子植物育种, 2015, 13(9): 2147-2154.
[21] Yang, Q., Yin, Y.L., Xu, G.J., et al. (2015) A Novel Protein with Anti-Metastasis Activity on 4T1 Carcinoma from Medicinal Fungus Cordyceps militaris. Interna-tional Journal of Biological Macromolecules, 80, 385-391.
https://doi.org/10.1016/j.ijbiomac.2015.06.050
[22] Park, B.T., Na, K.H., Jung, E.C., et al. (2009) Antifungal and Anticancer Activities of a Protein from the Mushroom Cordyceps militaris. Korean Journal of Physiology and Pharmacology, 13, 49-54.
https://doi.org/10.4196/kjpp.2009.13.1.49
[23] Zhang, Y.G., Liu, S.C., Liu, H.W., et al. (2009) Cycloaspeptides F and G, Cyclic Pentapeptides from a Cordyceps-Colonizing Isolate of Isariafarinosa. Journal of Natural Products, 72, 1364-1367.
https://doi.org/10.1021/np900205m
[24] Isaka, M., Srisanoh, U., Lartpotnmatulee, N., et al. (2007) ES-242 De-rivatives and Cycloheptapeptides from Cordyceps sp. Strains BCC 16173 and BCC 16176. Journal of Natural Products, 70, 1601-1604.
https://doi.org/10.1021/np070357h
[25] Park, N.S., Lee, K.S., Sohn, H.D., et al. (2005) Molecular Cloning, Ex-pression, and Characterization of the Cu, Zn Superoxide Dismutase (SOD1) Gene from the Entomopathogenic Fungus Cordyceps militaris. Mycologia, 97, 130-138.
https://doi.org/10.1080/15572536.2006.11832846
[26] 阿萨(Md.Asaduzzaman Khan). 白藜芦醇通过调节抗氧化酶活性而呈现抗肿瘤效应[D]: [博士学位论文]. 长沙: 中南大学, 2013.
[27] Choi, J.N., Kim, J., Lee, M.Y., et al. (2010) Metabolomics Revealed Novel Isoflavones and Optimal Cultivation Time of Cordyceps militaris Fermentation. Journal of Agricultural and Food Chemistry, 58, 4258-4267.
https://doi.org/10.1021/jf903822e
[28] Kim, J.H., Park, D.K., Lee, C.H., et al. (2012) A New Isoflavone Glycitein 7-O-beta-d-Glucoside 4’-O-methylate, Isolated from Cordyceps militaris Grown on Germinated Soybeans Extract, Inhibits EGF-Induced Mucus Hypersecretion in the Human Lung Mucoepidermoid Cells. Phytotherapy Research, 26, 1807-1812.
https://doi.org/10.1002/ptr.4655
[29] Khadem, H.S.E. and Ashry, E.S.H.E. (1973) Synthesis of Cordycepin-C [8-(3’-deoxy-β-D-erythro-pentofuranosyl) Adenine. Carbohydrate Research, 29, 525-527.
https://doi.org/10.1016/S0008-6215(00)83043-8
[30] Hansen, O.K. (1964) The Inhibition of 5-Phosphoribosyl-1-Pyrophosphate Formation by Cordycepin Triphosphate in Extracts of Ehrlich Ascites Tumor Cells. Biochimica et Biophysica Acta, 80, 504-507.
https://doi.org/10.1016/0926-6550(64)90154-9
[31] Kako, K., Hayakawa, H., Tanaka, H., et al. (1997) A New Entry to 2-Substituted Purine Nucleosides Based on Lithiation-Mediated Stannyl Transfer of 6-Chlooropurine Nucleo-sides. The Journal of Organic Chemistry, 60, 6833-6941.
https://doi.org/10.1021/jo970398q
[32] Chen, L.S., Stellrecht, C.M. and Gandhi, V. (2008) RNA-Directed Agent, Cordycepin, Induces Cell Death in Multiple Myeloma Cells. British Journal of Haematology, 140, 682-391.
https://doi.org/10.1111/j.1365-2141.2007.06955.x
[33] Mei, Y.X., Yang, W., Zhu, P.X., et al. (2014) Isolation, Characterization, and Antitumor Activity of a Novel Heteroglycan from Cultured Mycelia of Cordyceps sinensis. Planta Medica, 80, 1107-1112.
https://doi.org/10.1055/s-0034-1382960
[34] Jeong, J.W., Jin, C.Y., Park, C., et al. (2011) Induction of Apoptosis by Cordycepin via Reactive Oxygen Species Generation in Human Leukemia Cells. Toxicology in Vitro, 25, 817-824.
https://doi.org/10.1016/j.tiv.2011.02.001
[35] Imesch, P., Goerens, A., Fink, D., et al. (2012) MLH1-Deficient HCT116 Colon Tumor Cells Exhibit Resistance to the Cytostatic and Cytotoxic Effect of the Poly(A) Polymerase Inhibitor Cordycepin (3’-deoxyadenosine) in Vitro. Oncology Letters, 3, 441-444.
https://doi.org/10.3892/ol.2011.504
[36] Jung, S.M., Psrk, S.S., Kim, W.J., et al. (2012) Ras/ERK1 Pathway Regulation of p27KIP1-Mediated G1-Phase Cell-Cycle Arrest in Cordycepin-Induced Inhibition of the Proliferation of Vascular Smooth Muscle Cells. European Journal of Pharmacology, 681, 15-22.
https://doi.org/10.1016/j.ejphar.2012.02.003
[37] 廖园洪. 小分子化合物抑制白血病细胞生长的分子机制研究[D]: [博士学位论文]. 上海: 上海交通大学, 2015.
[38] 韩小娟. 虫草多糖药理活性及机制研究的进展[J]. 医学综述, 2014, 20(16): 3008-3010.
[39] 岳冬梅, 王林美, 李树英. 柞蚕蛹虫草水提物对人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的影响[J]. 中国蚕业, 2014, 35(3): 23-26.
[40] 刘特思, 吕游, 闫文帝, 等. 虫草素通过ERK1/2、Ezrin和Akt信号通路抑制胆囊癌细胞SNU-308的增殖和迁移[J]. 中国病理生理杂志, 2018, 34(8): 1434-1442.
[41] Jayakimar, T., Chiu, C.C., Wang, S.H., et al. (2014) Anti-Cancer Effects of CME-1, a Novel Polysaccharide, Purified from the Mycelia of Cordyceps sinensis against B16-F10 Melanoma Cells. Journal of Cancer Research and Therapeutics, 10, 43-49.
https://doi.org/10.4103/0973-1482.131365
[42] Jeong, J.W., Jin, C.Y., Park, C., et al. (2012) Inhibition of Migration and Invasion of LNCa P Human Prostate Carcinoma Cells by Cordycepin through Inactivation of Akt. International Journal of Oncology, 40, 1697-1704.
[43] Golubovskaya, V. and Wu, L.J. (2016) Different Subsets of T Cells, Memory, Effector Functions, and CAR-T Immunotherapy. Cancers, 8, 36.
https://doi.org/10.3390/cancers8030036
[44] 诸葛定娟, 程敏, 董文彬, 等. 虫草多糖对荷瘤小鼠T淋巴细胞及其亚群数量与功能的影响[J]. 中国现代应用药学, 2016, 33(5): 528-533.
[45] 叶小弟, 郑高利. 冬虫夏草及其菌丝体多糖免疫药理学研究进展[J]. 中国中医药科技, 2014, 21(1): 107-109.
[46] Nakayama, H. (2014) Overex-pression of Fibronectin Confers Cell Adhesion? Mediated Drug Resistance (CAM-DR) against 5-FU in Oral Squamous Cell Carcinoma Cells. International Journal of Oncology, 44, 1376-1384.
https://doi.org/10.3892/ijo.2014.2265
[47] Li, D.H., Pan, Z.K., Ye, F., et al. (2014) S-1-Based versus 5-FU-Based Chemotherapy as First-Line Treatment in Advanced Gastric Cancer: A Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Tumor Biology, 35, 8201-8208.
https://doi.org/10.1007/s13277-014-2099-2
[48] Guo, X.L., Hu, F., Zhang, S.S., et al. (2014) Inhibition of p53 Increases Chemosensitivity to 5-FU in Nutrient-Deprived Hepatocarcinoma Cells by Suppressing Autophagy. Cancer Letters, 346, 278-284.
https://doi.org/10.1016/j.canlet.2014.01.011
[49] Ducreux, M., Dahan, L., Smith, D., et al. (2014) Bevacizumab Combined with 5-FU/Streptozocin in Patients with Progressive Metastatic Well-Differentiated Pancreatic Endocrine Tumours (BETTER Trial): A Phase II Non-Randomised Trial. European Journal of Cancer, 50, 3098-3106.
https://doi.org/10.1016/j.ejca.2014.10.002
[50] Zhang, H.H., Tang, J.L., Li, C., et al. (2015) MiR-22 Regulates 5-FU Sensitivity by Inhibiting Autophagy and Promoting Apoptosis in Colorectal Cancer Cells. Cancer Letters, 356, 781-790.
https://doi.org/10.1016/j.canlet.2014.10.029
[51] Folprecht, G., Pericay, C., Saunders, M.P., et al. (2016) Oxa-liplatin and 5-FU/Folinic Acid (Modified FOLFOX6) with or without Aflibercept in First-Line Treatment of Patients with Metastatic Colorectal Cancer: The AFFIRM Study. Annals of Oncology, 27, 1273-1279.
https://doi.org/10.1093/annonc/mdw176
[52] Li, X.R., Wang, S.X., Li, Z.Z., et al. (2017) Retracted: NEAT1 Induces Epithelial-Mesenchymal Transition and 5-FU Resistance through the miR-129/ZEB2 Axis in Breast Cancer. FEBS Letters, 591, 570-570.
https://doi.org/10.1002/1873-3468.12474
[53] Hainsworth, J.D., Meluch, A.A., Mcclurkan, S., et al. (2002) In-duction Paclitaxel, Carboplatin, and Infusional 5-FU Followed by Concurrent Radiation Therapy and Weekly Paclitax-el/Carboplatin in the Treatment of Locally Advanced Head and Neck Cancer. The Cancer Journal, 8, 311-321.
https://doi.org/10.1097/00130404-200207000-00007
[54] 付楚溪, 焦阳, 李思雨, 等. 蛹虫草中虫草素抗癌活性研究进展[J]. 食品安全导刊, 2015(9X): 155-157.
[55] 张楠, 逄利, 凡文博, 等. 蛹虫草小分子肽增强胃癌细胞株SGC-7901对氟尿嘧啶化疗的敏感性[J]. 中国老年学杂志, 2015, 35(13): 3520-3521.