摘要: 目的：基于网络药理学和分子对接技术，探讨经验方归元膏的活性成分防治慢性疲劳综合征(CFS)的潜在机制。方法：从TCMSP数据库、BATMAN数据库筛选归元膏的化学成分和靶点，通过GeneCards、OMIM、DisGenet数据库检索收集CFS靶点，将归元膏作用靶点和疾病靶点取交集，使用Cytoscape Version 3.9.1制做药物和疾病靶点韦恩图，运用STRING数据库构建蛋白质与蛋白质相互作用的PPI网络作用图，并通过Cytoscape3.8.2软件中的插件CytoNCA筛选关键靶点，并将交集靶点导入David数据库，利用微生信程序进行基因本体(GO)和京都和基因组百科全书(KEGG)富集分析，并通过Cytoscape3.8.2构建归元膏药物–有效成分–靶点和归元膏药物–成分–靶点–通路网络，最后用AutoDock vinna软件进行分子对接验证。结果：检索出归元膏活性成分有111个，其中quercetin，isoflavanone，poriferasta-7,22E-dien-3beta-ol，hancinol，orchinol等为归元膏防治CFS的关键成分，CFS相关靶点507个，其中IL-6 (白细胞介素-6)，TNF (肿瘤坏死因子)，STAT3 (信号转导及转录激活因子3)，JUN，BCL2 (B细胞淋巴瘤/白血病-2)，HIF1A (缺氧诱导因子1
α亚单位)，AKT1 (AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1)，CASP3 (caspase-3)，MMP9 (基质金属蛋白酶9)，NFKB1 (核因子kappa B亚基1)为防治CFS的关键靶点，GO富集分析示生物学过程方面可能通过对凋亡过程的负调控、细胞增殖的正调控、蛋白质磷酸化的正调控、内皮细胞增殖的正调控等，分子功能主要包括酶结合、受体结合、蛋白酶结合等；细胞功能主要包含线粒体、蛋白质复合物、细胞内膜结合的细胞器等。KEGG富集分析一共得到186条信号通路，主要与PI3K-Akt通路、卡波西肉瘤相关疱疹病毒感染、丝裂原活化蛋白激酶信号通路等有关。分子对接结果表明归元膏中的核心作用靶点和主要活性成分具备稳定性的结合活性。结论：归元膏将quercetin、poriferasta-7,22E-dien-3beta-ol、orchinol、isoflavanone等关键活性成分与IL6、TNF、STAT3、JUN、BCL2、HIF1A、AKT1和CASP3等靶点结合，通过对PI3K/Akt、MAPK、NF-
κB等多条信号通路的调控，调节了CFS患者的免疫反应、细胞凋亡、代谢紊乱等多个生物学过程。通过激活抗凋亡通路、抑制促炎因子的产生和调节能量代谢，验证了该方多靶点多线路的调控，发挥了多靶点、多通路的协同作用，显著改善了CFS的症状。
Abstract: Objective: Based on network pharmacology and molecular docking technology, this study explores the potential mechanisms of active ingredients in the empirical formula Guiyuan Ointment for the prevention and treatment of chronic fatigue syndrome (CFS). Methods: Chemical components and targets of Guiyuan Ointment were screened from the TCMSP database and BATMAN database. CFS targets were collected through GeneCards, OMIM, and DisGenet databases. The intersection of Guiyuan Ointment’s action targets and disease targets was taken. Cytoscape Version 3.9.1 was used to create a Venn diagram of drug and disease targets. The STRING database was employed to construct a protein-protein interaction (PPI) network diagram, and key targets were screened using the CytoNCA plugin in Cytoscape 3.8.2 software. The intersection targets were imported into the David database, and gene ontology (GO) and Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG) enrichment analyses were performed using the microbioinformatics program. Cytoscape 3.8.2 was used to construct the Guiyuan Ointment drug-effective component-target and drug-component-target-pathway networks. Finally, molecular docking validation was conducted using AutoDock Vina software. Results: A total of 111 active components of Guiyuan Ointment were retrieved, among which quercetin, isoflavanone, poriferasta-7,22E-dien-3beta-ol, hancinol, and orchinol are key components for the prevention and treatment of CFS by Guiyuan Ointment. There are 507 CFS-related targets, with IL-6 (interleukin-6), TNF (tumor necrosis factor), STAT3 (signal transducer and activator of transcription 3), JUN, BCL2 (B-cell lymphoma/leukemia-2), HIF1A (hypoxia-inducible factor 1α subunit), AKT1 (AKT serine/threonine kinase 1), CASP3 (caspase-3), MMP9 (matrix metallopeptidase 9), and NFKB1 (nuclear factor kappa B subunit 1) being key targets for the prevention and treatment of CFS. GO enrichment analysis showed that in terms of biological processes, it may involve negative regulation of apoptosis, positive regulation of cell proliferation, positive regulation of protein phosphorylation, and positive regulation of endothelial cell proliferation, etc. The main molecular functions include enzyme binding, receptor binding, and protease binding, etc. The main cellular functions involve mitochondria, protein complexes, and cell organelles bound to the intracellular membrane, etc. KEGG enrichment analysis yielded a total of 186 signaling pathways, mainly related to the PI3K-Akt pathway, Kaposi’s sarcoma-associated herpesvirus infection, and mitogen-activated protein kinase signaling pathway, etc. The molecular docking results indicated that the core action targets and main active components in Guiyuan Ointment have stable binding activity. Conclusion: Guiyuan Ointment combines key active components such as quercetin, poriferasta-7,22E-dien-3beta-ol, orchinol, and isoflavanone with targets like IL6, TNF, STAT3, JUN, BCL2, HIF1A, AKT1, and CASP3. By regulating multiple signaling pathways such as PI3K/Akt, MAPK, and NF-κB, it modulates various biological processes in CFS patients, including immune response, cell apoptosis, and metabolic disorders. Through activating anti-apoptotic pathways, inhibiting the production of pro-inflammatory factors, and regulating energy metabolism, it verifies the multi-target and multi-pathway regulation of this formula, exerting synergistic effects on multiple targets and pathways, and significantly improving the symptoms of CFS.
1. 引言
慢性疲劳综合症(Chronic Fatigue Syndrome，简称CFS)已成为全球范围内重要的公共卫生问题。在全球范围内，CFS的发病率估计为0.42%~2.6%，且在近几年发病率呈明显上升趋势，临床主要表现为持续半年以上的慢性、反复(持续)发作性深度疲劳，同时可伴有睡眠异常、头痛、咽痛、肌肉、关节疼痛及焦虑、抑郁等精神、躯体异常症状[1]。因其较高的发病率、尚不明确的发病机制和暂无循证医学证明的现代医学防治方法的特点[2] [3]，使人们对该疾病的研究探索与日俱增，对于CFS的治疗，现代医学使用抗病毒、抗抑郁焦虑药物，静脉注射免疫球蛋白，干扰素及类固醇药物等治疗方法，但临床疗效并不理想[4]。而传统医学包括中药、艾灸、针刺、推拿等特色疗法在临床及实验中疗效显著。其中中药，尤其是膏方通过煎煮浓缩而成，其特点为服用方便、体积小、易于储存和携带、口味宜人、便于吸收以及毒性较低，在防治CFS这种慢性病尤其具有优势。归元膏作为导师的经验用方，“归元”之名取自《医宗金鉴·张仲景》“旋覆代赭石汤方”方解引罗天益曰：“此胃虚气失升降之法，复用此法理之，则胸中转否为泰。其为归元固下之法。”意为病体康复；本方补气健脾和中，方中黄芪、党参补气健脾为君，山药、茯苓平补肺、脾、肾为臣，枸杞滋补肝肾、养阴补血为佐药，麦冬养阴清热，并制补气之火为使药，全方补气健脾，和中之功，补而不腻、温而不燥、补气为主、通行上中下三焦，主治善肺脾气虚、气阴不足所致的神疲乏力，气短、腹胀、便溏、消化不良等症。适用于矽肺患者、免疫功能低下的微量元素缺乏人群，对慢性阻塞性疾病，肺癌中、晚期，还可用于术后、产后、病后体质虚弱患者有辅助治疗作用。经过十余年临床验证，对于CFS患者疗效尤其显著，但本方防治CFS机制尚不明确，故本研究通过网络药理学方法探讨了归元膏防治CFS的干预机制，验证归元膏对于CFS的临床疗效，为临床提供证据，同时为后续研究提供了方向。
2. 方法
2.1. 收集并筛选归元膏活性成分及其潜在靶点
黄芪、党参、山药、茯苓、枸杞运用中药系统药理数据库(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform, TCMSP)根据OB ≥ 30，DL ≥ 0.18筛选条件，获取活性成分及靶点，利用Uniprot (http://www.swissadme.ch/)数据库对靶点的蛋白名称进行转换。因其中麦冬在TCMSP中未检索出，故运用Herb (http://herb.ac.cn/)进行活性成分的筛选，Herb数据库得到的化合物根据药代动力学特征ADME (http://www.swissadme.ch/) (吸收、分配、代谢和排泄)进行筛选，设定筛选条件：GI absorption选high，Lipinski，Ghose，veber，Ean，Megge中至少3个yes，获取筛选后的化合物，采用Swiss target prediction (http://www.swisstargetprediction.ch/result.php?job=100970259&organism=Homo_sapiens)数据库进行有效化合物成分靶点进行信息再确认。
2.2. CFS的疾病相关靶点预测
通过GeneCards (https://www.genecards.org/)、OMIM (https://omim.org/)数据库，以“Chronic fatigue syndrome”作为关键词检索，GeneCards数据库中的疾病靶点筛选标准为得分 ≥ 20，获取所有慢性疲劳综合征靶点。运用Venny2.1.0 (https://bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/index.html)软件，将归元膏药物作用靶点基因与慢性疲劳综合征的相关基因取交集，制作CFS-归元膏(交集靶点)的韦恩图。
2.3. 构建药物–活性成分–靶点–疾病网络
导入Cytoscape3.10.1软件，绘制中药–活性成分–靶点–疾病网络，运用Analyze Network获取度值，并根据度值进行排序。
2.4. 蛋白相互作用网络构建与核心靶点筛选
将CFS-归元膏(交集靶点)导入STRING平台(https://string-db.org)，物种选择“Homo sapiens”，置信度(Medium_confidence) ≥ 0.4，隐藏游离节点，构建归元膏防治CFS形成的蛋白互作网(Protein-Protein Interaction Network, PPI)。将药物–活性成分–靶点基因–疾病形成数据导入Cytoscape 3.10.0软件，利用Cytoscape软件中的NetworkAnalyzer工具进行网络拓扑学分析，构建核心靶点PPI网络。
2.5. GO和KEGG富集分析
将归元膏与CFS的相关靶点导入David (https://david.ncifcrf.gov/tools.jsp)分别进行基因本体(gene ontology, GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)通路富集分析，并利用微生信平台进行可视化分析。
2.6. 分子对接验证
在pubchem中得到归元膏关键活性成分的2D结构，使用AutoDock Vina软件(http://vina.scripps.edu/)，下载分子对接所需要的配体和蛋白质，对于目标蛋白，先利用uniprot搜索基因对应的蛋白，再找出最符合的蛋白链，再在PDB数据库(https://www.rcsb.org/)中搜索，在PDB数据库中将获得的晶体结构需预处理(比如去除加氢、修饰氨基酸、优化能量以及调整力场参数)，下载配体结构
(https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/)之后满足配体结构的低能量构象。利用pyrx软件(https://pyrx.sourceforge.io/)内部的vina进行对接。
3. 结果与分析
3.1. 药物活性成分的筛选
通过数据库检索经筛选后得到活性成分为111个，重要活性成分如表1。
Table 1. Important active ingredients
表1. 重要活性成分
中药名 |
拉丁文 |
配伍 |
重要活性成分 |
黄芪 |
Stragalus membranaceus (Fisch.) Bunge |
君药 |
Hederagenin、quercetin、Mairin、Jaranol、isorhamnetin、 3,9-di-O-methylnissolin、7-O-methylisomucronulatol等 |
党参 |
Codonopsis pilosula |
君药 |
Stigmasterol、glycitein、poriferasta-7,22E-dien-3beta-ol、Perlolyrine、Diop、isoflavone、Spinasterol等 |
山药 |
Dioscoreae Rhizoma |
臣药 |
Stigmasterol、campesterol、diosgenin、piperlonguminine、
Kadsurenone、hancinone C、Isofucosterol、hancinol等 |
枸杞 |
Lycium |
佐药 |
Quercetin、Stigmasterol、glycitein、campesterol、Sitosterol alpha1、Cycloartenol、Mandenol、Ethyl linolenate等 |
茯苓 |
Poria |
佐药 |
trametenolic acid、Cerevisterol、ergosta-7,22E-dien-3beta-ol、
Ergosterol peroxide、Poricoic acid A、achymic acid、oricoic acid B、Poricoic acid C、dehydroeburicoic acid等 |
麦冬 |
Ophiopogon japonicus |
使药 |
ophiopogonone b、isoophiopogonone a、ophiopogonanone a、
orchinol、n-trans-feruloyltyramine、ophiopogonanone b、
ophiopogonone c、ophiopogonanone c |
3.2. 韦恩图
搜索得到1812个与慢性疲劳综合征相关的基因靶点，将药物与疾病靶点合并取交集，得到197个药物防治慢性疲劳综合征靶点，绘制韦恩图，见图1。
Figure 1. Drug-disease target Venn diagram
图1. 药物–疾病靶点韦恩图
3.3. “成分–主要靶点–疾病”网络
将交集靶点映射得到的活性成分及疾病交集靶点导入Cytoscape 3.10.0中进行可视化处理，构建“成分–靶点–疾病”网络图，如图2所示。对该网络进行分析可知，该网络图中共有289个节点和1130条边。其中同一活性成分可能对应不同靶点，不同活性成分也可能对应同一靶点，这表明药物是通过多成分多靶点作用于疾病。其中度值(Degree)排名前七的节点所对应的化学成分分别为quercetin、poriferasta-7,22E-dien-3beta-ol、orchinol、isoflavanone、hancinol、ruscogenin、Jasmolone这7种成分作用靶点数量较多，见表2。
Table 2. Top 10 active ingredients ranked by Degree value
表2. Degree值排名前10的活性成分
序号 |
化合物 |
Degree值 |
1 |
quercetin |
80 |
2 |
poriferasta-7,22E-dien-3beta-ol |
38 |
3 |
orchinol |
37 |
4 |
isoflavanone |
30 |
5 |
hancinol |
30 |
6 |
ruscogenin |
30 |
7 |
Jasmolone |
30 |
8 |
kaempferol |
29 |
9 |
ophiopogonanone b |
29 |
10 |
Denudatin B |
28 |
Figure 2. “Component-Target-Disease” network diagram
图2. “成分–靶点–疾病”网络图
3.4. PPI网络图构建及关键靶点筛选
将197个交集靶点导入String数据库进行分析，得到PPI蛋白互作图，如图3。该网络中包含197个节点，4789条边。其中度值排名前8的节点为IL6、TNF、STAT3、JUN、BCL2、HIF1A、AKT1、CASP3，见表3，表明这些节点在PPI网络中处于核心位置，节点联系较为紧密，如图4。
Figure 3. Intersection target PPI network diagram
图3. 交集靶点PPI网络图
Table 3. Top 10 key targets ranked by Degree value
表3. Degree值排名前10的关键靶点
序 |
靶点 |
Degree值 |
1 |
IL6 |
73 |
2 |
TNF |
73 |
3 |
STAT3 |
73 |
4 |
JUN |
73 |
5 |
BCL2 |
72 |
6 |
HIF1A |
72 |
7 |
AKT1 |
72 |
8 |
CASP3 |
72 |
9 |
MMP9 |
71 |
10 |
NFKB1 |
71 |
11 |
IL1B |
71 |
12 |
PPARG |
71 |
13 |
TP53 |
71 |
14 |
PTGS2 |
71 |
Figure 4. Key target PPI network
图4. 关键靶点PPI网络
3.5. 对药物防治CFS交集靶点的GO分析结果
利用DAVID数据库对作用靶点进行富集分析，得到图5所示GO富集图，纵坐标代表GO的各个条目，横坐标代表富集到与该条目的靶点数目。生物学过程(Biological Process, BP)主要涉及凋亡过程的负调控、细胞增殖的正调控、蛋白质磷酸化的正调控、内皮细胞增殖的正调控等；分子功能(Molecular Function, MF)主要包括酶结合、受体结合、蛋白酶结合等；细胞组成成分(Cellular Component, CC)主要包含线粒体、蛋白质复合物、细胞内膜结合的细胞器等。对图进行分析可知，共得到1269条GO富集条目，其中属于BP的996条，属于CC的102条，属于MF的171条。
Figure 5. Gene Ontology enrichment analysis
图5. GO富集分析
3.6. KEGG代谢通路富集分析
对靶点进行KEGG通路富集分析，纵坐标为不同KEGG通路，气泡大小为基因个数，横坐标为fold enrichment，颜色深浅同样为-lg(P)，一共富集得到186条信号通路，按照p-Value值对富集通路进行了排序，对前30条通路绘制气泡图进行可视化分析，如图6所示。
Figure 6. KEGG metabolic pathway enrichment bubble chart
图6. KEGG代谢通路富集气泡图
3.7. 分子对接
Table 4. Molecular docking
表4. 分子对接
|
quercetin |
isoflavanone |
poriferasta-7,22E-dien-3beta-o |
hancinol |
orchinol |
IL-6 |
−7.3 |
−7.6 |
−6.4 |
−6.4 |
−6.5 |
TNF |
−7.1 |
−6.3 |
−5.8 |
−5.7 |
−5.8 |
STAT3 |
−8.2 |
−7.2 |
−6.8 |
−6.4 |
−6.6 |
JUN |
−9.5 |
−7.2 |
−6.8 |
−6.0 |
−6.2 |
BCL2 |
−7.9 |
−7.2 |
−7.1 |
−7.3 |
−6.6 |
Figure 7. BCL2-hancinol
图7. BCL2-hancinol
Figure 8. BCL2-isoflavanone
图8. BCL2-isoflavanone
Figure 9. IL6-quercetin
图9. IL6-quercetin
Figure 10. JUN-isoflavanone
图10. JUN-isoflavanone
Figure 11. JUN-quercetin
图11. JUN-quercetin
将2.4中得到的5个关键活性成分quercetin，isoflavanone，poriferasta-7,22E-dien-3beta-ol，hancinol，orchinol作为配体，以2.5中DC值排名居前5位的关键靶点IL-6，TNF，STAT3，JUN，BCL2受体，将二者进行分子对接验证。分子对接结果见表4。所有分子对接结合能均小于−20.93 kJ/mol，说明配体与受体结合较好。将结合能最低的5个结果使用PyMOL进行可视化分析。详见图7~11。
4. 讨论
CFS是一种复杂的综合征，具有多种免疫、神经内分泌及能量代谢方面的异常，其确切发病机制尚未明确。本研究以归元膏防治CFS的网络药理学分析为基础，初步揭示了其多靶点、多成分、多通路的潜在防治机制。
归元膏中黄芪、党参为君，补气养血，山药健脾益气为臣，佐以茯苓利水渗，麦冬滋阴生津；另枸杞滋补肝肾，共用可达补气滋阴，健脾补肾之功，通过网络药理学分析，筛选出了槲皮素(Quercetin)、异黄酮(Isoflavones)、菠菜甾醇(Poriferasterol)、山蒟醇(Hancinol)和红门兰醇(Orchinol)为治疗CFS核心活性成分。槲皮素是常见的黄酮类化合物，具有强大的抗氧化、抗炎和免疫调节作用。研究表明，槲皮素能够通过抑制氧化应激和炎症反应，减轻CFS患者的疲劳症状[5]。槲皮素通过PI3K/Akt信号通路发挥作用，有助于调节免疫系统，并改善细胞存活和代谢功能。异黄烷酮是黄酮类化合物中的一种，其抗炎、抗氧化和抗肿瘤等作用使其成为防治CFS的潜在成分[6]；异黄烷酮在调控内分泌失调方面也具有一定的疗效[7]。菠菜甾醇有显著的抗炎作用，发生机制可能与抑制炎症因子PGE2、缓激肽、5-羟色胺和组胺的释放有关[8]。山蒟醇和红门兰醇的均有调节免疫功能作用。山蒟醇具有明显的抗炎作用，可以通过抑制NF-κB信号通路降低CFS患者体内炎症因子的水平。红门兰醇则通过其对免疫细胞的调节作用，可能对CFS的免疫失调起到干预作用[9]。以上活性成分通过调节氧化应激、免疫失调和细胞凋亡等多个机制，归元膏能够缓解CFS的症状，并改善患者的临床状况。通过蛋白质–蛋白质相互作用(PPI)网络构建，本研究筛选出了归元膏防治慢性疲劳综合征(CFS)的关键靶点，包括IL-6 (白细胞介素6)、TNF (肿瘤坏死因子)、STAT3 (信号转导及转录激活因子3)、JUN、BCL2 (B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白)、HIF1A (缺氧诱导因子1α亚单位)、AKT1 (AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1)和CASP3 (半胱天冬酶3)等；这些靶点涉及免疫反应、炎症反应、细胞凋亡等多种生物学过程，是CFS发病机制的核心节点。IL-6和TNF是两种重要的促炎细胞因子，它们在CFS患者中通常表现为高水平。IL-6在炎症和免疫反应中起着关键作用，过量的IL-6不仅能够激活免疫系统，还与疲劳感程度密切相关[10]。TNF也在CFS的免疫失调中扮演重要角色，研究表明，CFS患者的TNF水平显著升高，与免疫细胞的功能障碍、神经内分泌异常及系统性炎症反应的加剧有直接关系[11]。STAT3作为转录因子，在细胞的免疫应答和炎症反应中具有重要作用。CFS患者中，STAT3的过度激活可能导致免疫失调和慢性炎症的持续[12] [13]。JUN属于AP-1 (激活蛋白-1)家族，参与细胞增殖、应激反应及凋亡调控。在CFS的免疫系统异常中，JUN的过度激活与免疫细胞的功能变化及炎症反应相关[14]。BCL2作为抑制性抗凋亡蛋白，在维持细胞生存和阻止细胞凋亡中起着关键作用。CFS患者常出现BCL2表达下调，导致细胞凋亡加剧，尤其是免疫细胞的损伤可能加重疾病的免疫系统紊乱[15]。HIF1A作为缺氧应答的关键调节因子，已被证明与CFS的能量代谢紊乱和细胞能量应答有关。HIF1A的激活可能导致细胞代谢的改变，并在氧化应激中起到关键作用[16]，AKT1则通过PI3K/Akt通路调控细胞增殖、存活及抗凋亡等生物学过程，在免疫功能、神经内分泌调节及能量代谢方面均具有重要作用[17]；这些靶点的作用为理解归元膏对CFS的防治机制提供了重要线索。归元膏通过多条信号通路发挥其防治慢性疲劳综合征(CFS)的作用，通过KEGG富集分析，识别多个与CFS相关的关键信号通路，这些通路可直接影响CFS的病理过程，还可能通过调节免疫反应、细胞凋亡及代谢功能等途径改善CFS的症状；PI3K/Akt通路是细胞存活、增殖、代谢和抗凋亡的重要信号通路，研究表明，PI3K/Akt通路在CFS中发挥着重要作用，尤其是在细胞能量代谢紊乱和免疫失调方面。归元膏中的槲皮素、异黄烷酮和菠菜甾醇等成分能够通过激活PI3K/Akt通路，促进细胞的抗凋亡反应，从而减轻CFS患者的疲劳感。这一通路的激活不仅有助于细胞代谢恢复正常，还能通过调节免疫细胞的功能，减轻慢性炎症的症状[18]。MAPK (丝裂原活化蛋白激酶)通路在细胞增殖、分化、应激反应及炎症反应中具有重要作；通过多种亚型(如ERK、JNK、p38)调节细胞内信号的传递，参与细胞应激反应及免疫调节。在CFS患者中，MAPK通路的异常激活与免疫细胞的功能障碍、神经内分泌失调及慢性炎症的持续有关；归元膏中的槲皮素和异黄烷酮能够通过调节MAPK通路，抑制免疫细胞过度激活，减轻细胞因子(如TNF-α和IL-6)的释放，从而缓解CFS的免疫和炎症反应[19]。NF-κB (核因子κB)是调节免疫反应和炎症反应的关键转录因子，其过度激活与CFS患者体内的慢性炎症反应密切相关[20]，CFS患者的免疫系统存在长期的炎症反应，其中NF-κB的激活是一个核心因素。槲皮素、异黄烷酮和菠菜甾醇通过抑制NF-κB的激活，能够减少促炎因子的分泌(如IL-6、TNF)，从而降低CFS的炎症水平[21]。癌症相关信号通路(hsa05200)涉及细胞增殖、凋亡、血管生成和肿瘤转移等多个生物学过程，CFS患者的免疫系统异常和细胞增殖功能的紊乱可能与癌症的某些信号通路重叠。综合以上作用机制可得出归元膏将槲皮素、异黄烷酮和菠菜甾醇等关键活性成分与IL-6、TNF、STAT3、JUN、BCL2、HIF1A、AKT1和CASP3等靶点结合，通过对PI3K/Akt、MAPK、NF-κB等多条信号通路的调控，调节了CFS患者的免疫反应、细胞凋亡、代谢紊乱等多个生物学过程。通过激活抗凋亡通路、抑制促炎因子的产生和调节能量代谢，发挥了多靶点、多通路的协同作用，显著改善了CFS的症状。这一机制不仅表明归元膏的防治效果依赖于多条信号通路的共同作用，也为未来通过靶向这些通路开发CFS的防治策略提供了理论依据。
基金项目
四川省中医药管理局科学技术研究专项课题(2023MS606)。