1. 引言
肾细胞癌(RCC)是人类最具侵略性的恶性肿瘤之一，2022年全球估计有434,840例病例[1]。世界范围内，RCC约占所有癌症病例的2%~3% [2]，也是癌症死亡的重要原因(占总癌症死亡的1.8%)。在RCC的亚型中，透明细胞肾细胞癌(ccRCC)是最常见的一种，占到RCC的75%~80%左右[3]。尽管在过去的几十年中，肾细胞癌的诊断技术和治疗方法得到了改善，但近30%的ccRCC患者在诊断时出现了转移或局部进展，而局部RCC的患者中有1/3在手术治疗后出现了局部复发和转移[4] [5]。复杂的生物学过程和难以理解的分子机制导致ccRCC患者的预后不良。因此，确定ccRCC进展关键步骤的分子机制变得迫在眉睫。
MYB转录因子家族与细胞周期调控密切相关，在维持基因组完整性、DNA复制、细胞分化、细胞凋亡和其他生理功能中起关键作用。MYBL2是Myb转录因子家族的高度保守成员，通常在快速分裂的细胞中表达，例如成年造血干细胞和胚胎干细胞[6]。可以看出，MYBL2广泛表达并且与细胞增殖程度密切相关[7]。最近，发现MYBL2在各种胰腺癌[8]、肺癌[9]和结直肠癌[10]等恶性肿瘤中异常表达。此外，据报道MYBL2与几种恶性肿瘤类型的患者预后差有关[8]-[12]。这些数据表明MYBL2广泛参与细胞凋亡、细胞衰老、肿瘤发生和基因表达调控的进程。Sakai等[13]证明B-Myb的表达与RCC的临床III和IV期显着相关(P < 0.05)。但是，MYBL2表达与ccRCC发育和进展之间的关系尚待探索。
新兴研究揭示了肿瘤微环境(TME)在肿瘤发生中的独特作用。作为TME的重要组成部分，免疫浸润细胞近年来引起了许多研究人员的关注。最新证据表明，ccRCC具有高度的免疫浸润[14]。此外，浸润肿瘤的免疫细胞与患者的预后密切相关[15]。所以，通过遗传分析确定TME中的动态免疫成分对指导ccRCC患者的预后具有重要意义。
本研究的目的是根据从癌症基因组图谱(TCGA)获得的数据评估MYBL2表达在人ccRCC中的预后价值。在这项研究中，我们比较了ccRCC患者和健康个体之间MYBL2 mRNA的表达。然后，我们探讨了ccRCC患者MYBL2表达与总生存期(OS)和临床特征的相关性。结果表明，高表达MYBL2的患者的预后要差于低表达MYBL2的患者。此外，为探索与ccRCC中MYBL2相关的可能途径，通过基因富集分析(GSEA)鉴定了与MYBL2调控机制相关的信号转导途径。为了揭示MYBL2表达与免疫微环境之间的相关性，使用CIBERSORT算法分析了ccRCC中浸润的免疫细胞类型的比例。研究结果表明MYBL2是ccRCC诊断和预后的生物标志物。
2. 材料和方法
2.1. 数据库
从癌症基因组图谱(TCGA)数据库(http://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/)中获得了与临床数据相对应的基因组数据，而ccRCC药物敏感性数据则是获取于美国癌症(GDSC)数据库(https://www.cancerrxgene.org/)。该研究总共包括539例ccRCC组织和72例正常肾组织。详细的临床资料包括诊断时的年龄、性别、T分期、淋巴结状态、转移和临床分期，具体见表1。我们使用R软件(v.4.0.2)处理所有数据。
2.2. 统计分析
所有统计分析均使用R软件(v.4.0.2)进行。1) 使用Wilcoxon秩和检验分析了ccRCC和正常组之间MYBL2表达的比较。2) 应用Wilcoxon符号秩检验和logistic回归来鉴定MYBL2 mRNA表达与ccRCC临床特征之间的相关性。3) 将ccRCC样本根据MYBL2表达的中位水平分为高表达和低表达组，使用Kaplan-Meier曲线通过对数等级测试方法验证MYBL2高表达组和低表达组之间的总生存率(OS)的差异。4) 此外，在线工具GEPIA2验证了ccRCC样品中无病生存(DFS)与MYBL2之间的关系[16]。5) 进行单因素Cox分析以评估MYBL2表达和临床病理因素的预后价值。进行多因素Cox分析以比较MYBL2表达对存活以及其他临床特征的影响。在ccRCC细胞系中，为了确定药物的半数最大抑制浓度(IC50)与MYBL2表达之间的关联，使用R软件中的cor.test函数计算IC50和MYBL2表达的皮尔逊相关系数。P < 0.05被认为是MYBL2表达相关药物。
2.3. GSEA
GSEA被用来评估一组先验定义的基因在高和低MYBL2表达组之间是否表现出统计学上显著的差异表达[17]，以阐明MYBL2表达影响ccRCC预后的潜在机制。MYBL2的表达水平用作表型标签。对于每个分析，总共进行了1000个基因组排列。正常的P < 0.05和错误发现率(FDR) < 0.05被认为是显著富集基因集的两个必要条件。
2.4. 免疫细胞浸润分析
进行CIBERSORT算法以确定每位ccRCC患者中21种浸润免疫细胞的比例。之后，我们分析了MYBL2高表达和低表达组之间免疫浸润细胞的差异，并使用Wilcoxon秩和进行显著性检验。用Spearman相关检验检查MYBL2表达水平与浸润的免疫细胞之间的相关性。
3. 结果
3.1. 患者特征
表1列出了临床数据。我们研究的患者队列的中位年龄为61岁(26~90岁)。大多数肿瘤(43.5%, n = 230)是G2癌，39.1% (n = 207)是G3癌。I期疾病共269例患者(50.3%)，II期57例(10.7%)，III期125例(23.4%)和IV期83例(15.6%)。第一，第二，第三和第四阶段分别占51.2%，12.8%，33.9%和2.1%。505例中有79例(15.6%)有远处转移。257例中的17例(6.6%)有淋巴结转移。最后一次活着的受试者的中位随访时间为36.4个月(范围为0到122.3个月)。
Table 1. Clinical characteristics of ccRCC patients
表1. ccRCC患者的临床特征
Clinical characteristics |
|
Tota 537 |
% |
Age (y) |
|
61 (26~90) |
|
Gender |
Female |
191 |
35.6 |
Male |
346 |
64.4 |
Histological grade |
G1 |
14 |
2.6 |
G2 |
230 |
43.5 |
G3 |
207 |
39.1 |
G4 |
78 |
14.8 |
Stage |
Ⅰ |
269 |
50.3 |
II |
57 |
10.7 |
III |
125 |
23.4 |
IV |
83 |
15.6 |
T classification |
T1 |
275 |
51.2 |
T2 |
69 |
12.8 |
T3 |
182 |
33.9 |
T4 |
11 |
2.1 |
M classification |
M0 |
426 |
84.4 |
M1 |
79 |
15.6 |
N classification |
N0 |
240 |
93.4 |
N1 |
17 |
6.6 |
Survival status |
Survival |
367 |
68.3 |
Death |
170 |
31.7 |
ccRCC: clear cell renal cell carcinoma.
3.2. ccRCC中高MYBL2表达
如图1(A)所示，比较ccRCC和正常组织中MYBL2的表达，而ccRCC中MYBL2过表达(P < 0.05)。此外，我们分析了MYBL2在72对ccRCC和癌旁组织中的表达，MYBL2在ccRCC中的表达也类似(P < 0.05；图1(B))。
Figure 1. MYBL2 was significantly overexpressed in ccRCC. (A) MYBL2 was significantly upregulated in ccRCC tissues compared to normal kidney tissues; (B) MYBL2 was expressed at higher levels in ccRCC compared to non-cancerous adjacent tissues
图1. MYBL2在ccRCC中显著过表达。(A) 与正常肾组织相比，MYBL2在ccRCC组织中表达水平显著上调；(B) 与癌旁组织相比，MYBL2在ccRCC中的表达水平更高
3.3. MYBL2高表达的ccRCC倾向于发展到更高级的阶段
通过分析ccRCC中MYBL2表达与临床特征之间的相关性，我们知道MYBL2表达的增加与临床特征显著相关，包括性别(P < 0.05；图2(A))，组织学分级(P < 0.05；图2(B))，分期(P < 0.05；图2(C))，T分期(P < 0.05；图2(D))，N分期(P < 0.05；图2(E))和M分期(P < 0.05；图2(F))。单因素COX分析表明，MYBL2表达作为分类因变量(基于中值表达值1.41)与不良的临床病理特征相关(表2)。ccRCC中高MYBL2表达与病理分级显著相关(G3 vs. G1为OR = 4.54；G4 vs. G1为OR = 11.61)，分期(III vs. I为OR = 2.26；IV vs. I为OR = 4.50)，T分期(T3 vs. T1的OR = 2.94；T4 vs. T1的OR = 7)，远处转移(M1 vs. M0的OR = 3.48)，淋巴结状态(阳性vs.阴性的OR = 7.81)，性别(女性vs.男性OR = 0.69) (所有P < 0.05)。基于以上结果，我们有理由相信MYBL2是一种与风险相关的基因，可能参与肿瘤的发生和发展。
Table 2. The correlation between MYBL2 expression and clinical characteristics (Logistic regression)
表2. MYBL2表达与临床特征之间的相关性(Logistic回归分析)
Clinical characteristics |
Total (N) |
Odds ratio in MYBL2 expression |
P-Value |
Grade (G3 vs. G1) |
221 |
4.54 (1.37~20.52) |
0.0231 |
Grade (G4 vs. G1) |
92 |
11.61 (3.22~55.67) |
0.0005 |
Stage (III vs. I) |
394 |
2.26 (1.47~3.51) |
0.0002 |
Stage (IV vs. I) |
352 |
4.50 (2.62~7.97) |
<0.0001 |
T stage (T3 vs. T1) |
457 |
2.94 (1.99~4.37) |
<0.0001 |
T stage (T4 vs. T1) |
286 |
7.00 (1.76~46.53) |
0.0139 |
Metastasis (M1 vs. M0) |
505 |
3.48 (2.05~6.11) |
<0.0001 |
Lymph nodes (positive vs. negative) |
257 |
7.81 (2.12~50.40) |
0.0074 |
Sex (female vs. male) |
537 |
0.69 (0.48~0.99) |
0.0456 |
*Categorical dependent variable, greater or less than the median expression level.
Figure 2. The relationship between the expression MYBL2 and clinicopathological variables. (A) Gender; (B) Histological grade; (C) Pathological stage; (D) T stage; (E) N stage; (F) M stage
图2. MYBL2表达与临床特征的关系。(A) 性别；(B) 组织学分级；(C) 病理分期；(D) T分期；(E) N分期；(F) M分期
3.4. MYBL2表达是ccRCC患者预后的独立危险因素
如图3所示，生存分析表明MYBL2高表达患者的OS和DFS均较MYBL2低表达患者时间短(P < 0.05)。鉴于MYBL2表达水平与ccRCC患者的预后之间存在密切关系，我们创建了一个更好的预后模型。构建了一个新的列线图，以预测1、3和5年的OS (图4)。在单因素COX分析中，年龄([HR] = 1.033; [CI]: 1.019~1.047; P < 0.001)，病理学分级([HR] = 2.293; [CI]: 1.854~2.836; P < 0.001)，分期([HR] = 1.889; [CI]: 1.649~2.164; P < 0.001)，T分期([HR] = 1.941; [CI]: 1.639~2.299; P < 0.001)，远处转移([HR] = 4.284; [CI]: 3.106~5.908; P < 0.001)，MYBL2 ([HR] = 1.077; [CI]: 1.052~1.102; P < 0.001)与ccRCC患者的整体存活率相关(图5(A))。多因素COX分析表明，MYBL2表达是ccRCC患者预后的独立危险因素([HR] = 1.072, [CI]: 1.043~1.102, P <0.001) (图5(B))。
Figure 3. Survival analysis. (A) Correlation between MYBL2 expression and OS in ccRCC patients; (B) Correlation between MYBL2 expression and DFS in ccRCC patients
图3. 生存分析。(A) ccRCC患者MYBL2表达与OS的相关性；(B) ccRCC患者MYBL2表达与DFS的相关性
Figure 4. Nomogram for the prediction of outcome in patients with ccRCC
图4. 预测ccRCC患者预后的Nomogram列线图
Figure 5. Univariate Cox regression and multivariate Cox regression analysis. Forest plot based on univariate (A) and multivariate (B) Cox regression analysis of OS
图5. 单因素Cox分析和多因素Cox分析。基于OS的单因素(A)和多因素(B)Cox回归分析的森林图
3.5. 具有MYBL2表达的ccRCC的药物敏感性和耐药性
Figure 6. Analysis of drug sensitivity related to MYBL2 expression in renal cell carcinoma cell lines. Green represents drugs were selectivity for the ccRCC patients with MYBL2 expression (IC50 < 0); red indicates ccRCC patients with MYBL2 expression were resistant to drugs (IC50 > 0)
图6. 肾细胞癌细胞系MYBL2表达与药物敏感性分析。绿色表示药物对MYBL2表达的ccRCC患者具有选择性(IC50 < 0)；红色表示MYBL2表达的ccRCC患者耐药(IC50 > 0)
Table 3. MYBL2 expression-associated drugs
表3. MYBL2表达相关的药物
Drug |
Cor |
P-value |
Rapamycin |
−0.686 |
0.0055 |
PHA-665752 |
0.566 |
0.0133 |
GNF-2 |
0.562 |
0.0139 |
CGP-60474 |
−0.606 |
0.0147 |
BMS-536924 |
−0.589 |
0.0179 |
Cyclopamine |
0.534 |
0.0192 |
Selumetinib |
0.519 |
0.0227 |
CGP-082996 |
−0.563 |
0.0239 |
Salubrinal |
0.509 |
0.0253 |
Saracatinib |
−0.544 |
0.0293 |
Roscovitine |
0.495 |
0.0294 |
Paclitaxel |
−0.524 |
0.0362 |
SB 216763 |
0.469 |
0.0362 |
Lapatinib |
0.46 |
0.0362 |
Nilotinib |
0.452 |
0.0362 |
Erlotinib |
0.451 |
0.0362 |
Cor: Pearson correlation coefficient.
除了MYBL2表达对预后的影响外，我们还研究了MYBL2表达在ccRCC患者治疗中的作用。目前，对于转移性ccRCC的治疗，靶向治疗是局限性的，并且容易引起耐药性[18]。为了找寻有效的肿瘤抑制剂，用于ccRCC的个体化治疗，我们分析了从GDSC数据库获得的数据，以发现具有MYBL2表达的患者是否具有潜在的可选择性的药物。结果表明，雷帕霉素、CGP-60474、BMS-536924、CGP-082996、塞卡替尼和紫杉醇对MYBL2表达的ccRCC患者可能具有显著的抑制性(图6和表3)，使这些化合物成为MYBL2表达的ccRCC患者的治疗选择。此外，研究还显示，MYBL2表达的ccRCC患者可能对PHA-665752、GNF-2、环巴胺、司美替尼、Salubrinal、Roscovitine、SB216763、拉帕替尼、尼洛替尼和厄洛替尼具有耐药性(图6和表3)。总之，我们证明了某些药物对具有MYBL2表达的ccRCC细胞具有选择性抑制作用，这使其成为此类ccRCC患者的潜在个体化药物选择。
3.6. GSEA确定了MYBL2相关的信号通路
Figure 7. Enrichment plots from gene set enrichment analysis (GSEA). Each line representing one particular gene set with unique color, and up-regulated genes located in the left approaching the origin of the coordinates, by contrast the down-regulated lay on the right of x-axis. Only gene sets with NOM P < 0.05 and FDR < 0.05 were considered significant. (A) The enriched gene sets in MSigDB Collection (c2.cp.kegg.v6.2.symbols.gmt) by the high MYBL2 expression patients; (B), (C) GSEA indicated significant enrichment of immune-related phenotype in the high MYBL2 expression patients
图7. 基因集富集分析(GSEA)的富集图。每条线代表一个特定的基因集，具有独特的颜色，上调基因位于接近坐标原点的左侧，而下调基因位于右侧。只有NOM P < 0.05和FDR < 0.05的基因集被认为是显著的。(A) MYBL2高表达患者MSigD集合(c2.cp.kegg.v6.2.symbols.gmt)中富集的基因集；(B), (C) GSEA显示MYBL2高表达患者的免疫相关表型显著富集
以上研究表明MYBL2表达在ccRCC的发展中起着关键作用。为阐明MYBL2表达影响ccRCC预后的潜在机制，我们进行了GSEA探索低和高MYBL2表达组之间差异激活的信号通路。GSEA在MSigDB集合(c2.cp.kegg.v6.2.symbols.gmt)的富集方面存在显著差异(NOM P < 0.05和FDR < 0.05)。与IgA产生、自身免疫性甲状腺疾病、细胞因子–细胞因子受体相互作用，病毒性心肌炎，抗原加工和呈递，I型糖尿病，原发性免疫缺陷疾病，同源重组，造血细胞谱系，同种异体移植排斥，哮喘，移植物抗宿主病，碱基切除修复，DNA复制，自然杀伤细胞介导的细胞毒性，系统性红斑狼疮，细胞粘附分子(CAM)，利什曼原虫感染，蛋白酶体，胞质DNA传感途径和细胞周期均富集了MYBL2高表达组，MYBL2低表达组未富集基因。其中，六个基因组可能与ccRCC的进展显著相关(图7(A))。此外，我们发现高MYBL2表达组中富集了多个免疫基因组。因此，进行了更具针对性的GSEA，结果表明高MYBL2表达组的免疫相关表型(免疫应答和免疫系统过程途径)显著富集(图7(B)，图7(C)) [19]。这提示MYBL2表达可能与肿瘤免疫微环境有关。
3.7. MYBL2表达水平影响TME的免疫活性
为了进一步探讨MYBL2表达与免疫微环境之间的关系，使用CIBERSORT计算方法确定了每位ccRCC患者中21种免疫细胞的浸润比例(图8)。然后，分析了MYBL2高表达组和MYBL2低表达组之间的免疫浸润细胞水平的区别以及MYBL2表达水平与浸润的免疫细胞之间的相关性(图9)。结果表明，5种免疫细胞与MYBL2的表达呈正相关(CD8+ T细胞、CD4+记忆静止T细胞、CD4+记忆激活T细胞、滤泡辅助T细胞、调节性(Tregs) T细胞)和6种免疫细胞的表达与MYBL2的表达呈负相关(NK细胞静止，单核细胞，巨噬细胞M0，巨噬细胞M2，树突状细胞激活，肥大细胞静止)。以上数据进一步证明MYBL2表达水平可影响TME的免疫活性。
Figure 8. Immunocytes infiltrated profile in tumor patients. Barplot showing the proportion of 21 kinds of immunocytes infiltrated in ccRCC tumor patients. The listing of plot represents the patient ID
图8. 肿瘤患者免疫细胞浸润谱。柱状图显示21种免疫细胞在ccRCC肿瘤患者中的浸润比例。图的列表表示患者ID
Figure 9. Correlation of immunocytes infiltrated proportion with MYBL2 expression. (A) plot showed the ratio differentiation of 21 kinds of immune cells between ccRCC samples with low or high MYBL2 expression relative to the median of MYBL2 expression level; Green represents ccRCC patients with low MYBL2 expression; red indicates ccRCC patients with high MYBL2 expression; (B) Scatter plot showed the correlation of 11 kinds of immunocytes infiltrated proportion with the MYBL2 expression; (C) Venn plot revealed 11 kinds of immunocytes infiltrated correlated with MYBL2 expression on the basis of difference and correlation tests displayed above two figures
图9. 免疫细胞浸润比例与MYBL2表达的相关性。(A) 图为21种免疫细胞在MYBL2低表达或高表达的ccRCC样本中相对于MYBL2表达水平中位数的比例分化；绿色代表MYBL2低表达的ccRCC患者；红色表示MYBL2高表达的ccRCC患者；(B) 散点图显示11种免疫细胞浸润比例与MYBL2表达的相关性；(C) 根据上述两图的差异及相关试验，韦恩图显示11种浸润的免疫细胞与MYBL2表达相关
4. 讨论
最近，据报道在许多癌症实体中过表达的MYBL2与患者不良的预后有关。例如，已证明MYBL2在结直肠癌的进展中起关键作用，其表达与患者的预后有关[10]。Zhang等人证明了MYBL2在人类神经胶质瘤中的过表达与不良预后有关，作为Akt/FoxM1信号转导的关键下游因素，它促进人类神经胶质瘤的发展，可能成为分子靶向治疗的新候选基因和神经胶质瘤放射治疗的生物标志物[11]。此外，MYBL2还被认为是肺癌的重要致癌因子，其过表达导致各种下游基因(例如，COL11A1，COL6A1，FN1，MMP2，NID1，FLT4，INSR和CCNA1)的上调。参与细胞增殖，肿瘤发生和转移的关键途径(例如细胞外信号调节激酶(ERK)和磷酸化蛋白激酶B(Akt)的信号通路) [9]。这些研究表明MYBL2可以影响各种癌症的进展，并且MYBL2的过表达与患者的预后成正相关。
在这项工作中，我们试图探索MYBL2作为ccRCC预后因素的潜在能力。首先，基于TCGA数据，生物信息学分析显示ccRCC组织与正常组织之间MYBL2表达有显著差异。其次，生存分析表明，MYBL2表达高的患者比MYBL2表达低的患者的OS短。而且，MYBL2在ccRCC中的表达增加与晚期临床特征(高级别，分期晚，淋巴结转移，远处转移)相关。多因素Cox分析证明MYBL2可作为ccRCC患者的独立预后因素。药物敏感性分析显示多种药物对MYBL2表达的ccRCC患者具有显著的抑制性，这有助于MYBL2表达的ccRCC患者的个体化治疗。
我们还建立了MYBL2表达的预后模型，可以更准确地预测患者的OS。此外，为了进一步研究ccRCC中MYBL2致癌活性的潜在信号传导途径，我们使用TCGA数据进行了GSEA，MYBL2的高表达主要在肠道免疫网络中富集，用于产生IgA，细胞因子与细胞因子受体相互作用，DNA复制，自然杀伤细胞介导的细胞毒性，细胞粘附分子(CAM)和细胞周期。先前的研究已经证实，产生IgA的肠道免疫网络与肿瘤进展相关[20]，激活IgA产生信号通路的肠道免疫网络促进了肿瘤细胞的增殖和迁移[21]。细胞因子与细胞因子受体的相互作用可以调节细胞因子的相互作用，作为重要的免疫信号通路，在调节肿瘤的发展中起着关键作用[22] [23]。Macheret等报道DNA复制在肿瘤发生和进展中起关键作用，DNA复制应激应被视为癌症的标志[24]。天然杀伤细胞与肿瘤的进展和血管生成密切相关，其介导的细胞毒性在调节肿瘤微环境中起着重要的作用[25] [26]。文献证明，细胞周期表达和功能活性的增强与肿瘤细胞的增殖有关[27]。已有报道表明核苷酸切除修复改变可能是膀胱癌的重要生物标志物和治疗靶标[28]。越来越多的研究表明，细胞粘附分子(CAMs)在肿瘤的进展和转移中起着重要的作用，其在肿瘤治疗中的应用前景广阔[29]-[31]。综上所述，我们的结果表明MYBL2可能通过上述信号途径影响ccRCC的发展。
越来越多的证据表明，TME中的免疫细胞和基质细胞在肿瘤发生和发展中起促进作用。对于ccRCC，先前的研究已经证明肿瘤浸润免疫细胞的亚型与患者的预后有关[15] [32]。GSEA结果表明免疫基因组倾向于富集高MYBL2表达组。我们探索了通过MYBL2表达谱确定TME成分的可能性，以更准确地预测ccRCC的预后。之后，验证了MYBL2表达与免疫浸润细胞之间的相关性，结果表明11种免疫细胞与MYBL2的表达相关。总之，我们相信MYBL2可以通过影响各种浸润的免疫细胞的浸润水平来调节免疫微环境。
在这项研究中，我们分析了MYBL2表达及其在ccRCC中的预后作用。ccRCC患者MYBL2明显上调，预后不良。GSEA证明ccRCC中MYBL2的高表达与6个信号通路显著相关。此外，为探讨MYBL2表达在ccRCC治疗中的潜在作用，我们分析了与ccRCC细胞系MYBL2表达相关的药物敏感性。最后，我们证明了MYBL2表达水平可以影响TME的免疫活性。
不可避免地，我们的研究也有一些需要指出的局限性。由于数据的局限性，MYBL2对预后的预测能力仅在TCGA数据集中得到了验证，并且期望更多的患者数据集能够验证MYBL2的表现。另外，为了加速临床应用，这些发现还需要通过更多的数据进行验证，例如免疫组化或流式细胞分析。此外，我们的研究发现与ccRCC细胞系中MYBL2表达有关的药物不是治疗ccRCC的常见传统药物。因此，我们将在以后的研究中进一步验证MYBL2作为ccRCC的治疗靶标的可行性。
5. 结论
简而言之，这项研究表明，MYBL2在ccRCC中过表达，它是ccRCC患者生存不良的分子预后标志。此外，我们还揭示了MYBL2与免疫微环境之间的相关性。这些发现可能为ccRCC的预后评估提供新的见解，并为进一步研究ccRCC的肿瘤免疫性提供参考。雷帕霉素等药物可能是治疗MYBL2表达的ccRCC的有前景的药物。但是应进行进一步的实验验证，以证明MYBL2的生物学作用。
作者声明
韩雪：构思，撰写文章。张继鹏：数据下载，数据处理。李瑞阳：软件处理。王树超：验证结果，数据可视化。赵敏：数据监督管理。刘文健：撰写和修改。
竞争利益声明
作者声明他们没有已知的竞争性经济利益或个人关系可能会影响本文所报告的工作。
数据可用性声明
文章中包含了用于支持本研究结果的数据，这些数据可应要求从相应的作者处获得。
NOTES
*通讯作者。