中药调控Hippo信号通路干预乳腺癌的研究进展

Progress in Prevention and Treatment of Breast Cancer by Traditional Chinese Medicine Targeting Hippo Signaling Pathway

摘要: 乳腺癌(Breast cancer)是女性癌症中最常见的一种，其发病率和死亡率逐年持续升高，治疗方式目前以手术、化疗、靶向治疗、免疫治疗为主，但易出现晚期转移、耐药性等问题。Hippo通路是通过协调机械、代谢、细胞内外信号，调节细胞增殖分化与凋亡、器官生长、组织再生及伤口愈合等生理功能的保守信号通路。在BC中，Hippo通路的主要成分在细胞水平上的失调可诱导多个异常病理过程以促进BC的发展、转移和耐药。中药因其多靶点、多机制的特点在癌症的辅助治疗中具有重要地位。研究发现，中药单体中的萜类、皂苷类、酚类、生物碱类、黄酮类、核苷类化合物，中药提取物中的槐耳水提取物、紫苏叶提取物，中药复方中的复方苦参注射液、乳康饮均能通过调控Hippo信号通路，通过抑制细胞增殖分化及迁移、促进细胞凋亡、抑制干细胞干性、抑制上皮–间充质转化等机制对BC有一定治疗作用。本文通过归纳总结近年来中药靶向Hippo通路治疗BC的研究成果，旨在为后续研究和新药开发提供思路。

Abstract: Breast cancer is the most common type of female cancer, and its morbidity and mortality rates continue to increase year by year. Treatment is currently based on surgery, chemotherapy, targeted therapy, and immunotherapy, but it is prone to late metastasis and drug resistance. The Hippo pathway is a conserved signaling pathway that regulates cellular proliferation, differentiation and apoptosis, organ growth, tissue regeneration, and wound healing by coordinating mechanical, metabolic, and intra- and extracellular signals. In BC, dysregulation of the main components of the Hippo pathway at the cellular level can induce several abnormal pathological processes to promote the development, metastasis, and drug resistance of BC. Traditional Chinese medicine (TCM) has an important role in the adjuvant treatment of cancer due to its multi-target and multi-mechanism characteristics. It has been found that terpenoids, saponins, phenols, alkaloids, flavonoids, and nucleosides in TCM monomers, Sophora Japonica Water Extract and Extracts of Perilla frutescens var. Acuta (Odash) Kudo Leaves in TCM extracts, and Mechanism of Compound Kushen Injection and RuKang Yin in TCM compounds can have certain therapeutic effects on BC through regulating the Hippo signaling pathway by inhibiting cell proliferation and differentiation, migration, promoting apoptosis, inhibiting stem cell stemness, and inhibiting epithelial-mesenchymal transition. In this paper, we summarise the research results on the targeting of the Hippo pathway by traditional Chinese medicine in the treatment of BC in recent years, to provide ideas for subsequent research and new drug development.

1. 引言

乳腺癌(Breast cancer, BC)是女性癌症中最常见的癌症，约占四分之一，也是造成女性癌症相关死亡的第二位原因[1]。根据2022年世界卫生组织的数据，在全球恶性肿瘤发病率中，乳腺癌以11.6%高居第二，仅次于肺癌[2]。在中国，同年乳腺癌相关死亡占所有癌症死亡人数的6.9%，发病率也持续增高，乳腺癌成为了一个危害女性身心健康的巨大危险因素。对于乳腺癌的治疗，国际共识指南建议基于分期选取手术、化疗、靶向治疗、免疫治疗等基础治疗[3]。然而，由于BC亚型的不同导致全身治疗特异性较低、易产生耐药性、缺乏有效生物标记物等众多原因致使BC治疗存在许多挑战[4]。目前，Hippo信号通路正逐渐被证实为是一种肿瘤抑制通路，通过调控BC细胞增殖分化及凋亡、介导乳腺癌干细胞群表达、参与肿瘤微环境(TME)调节、参与免疫调节等过程在BC的发展进程中起到不可或缺的作用[5]。中药治疗癌症具有悠久的历史和丰富的实践经验，且经过现代药理学研究证实中药具有多靶点、多成分、低副作用的特点，其对肿瘤的抑制作用是多层次、多途径的[6]，所以中药已成为目前治疗癌症的重要辅助手段。

2. Hippo信号通路概述

Hippo通路是最早在果蝇体内被发现的能限制果蝇组织生长的进化保守的信号通路[7] [8]，经过对果蝇体内Hippo信号通路的机制研究，确定了这是由多个肿瘤抑制因子构成的激酶级联反应，后来被发现广泛存在于哺乳动物细胞内，其控制的生理功能包括细胞的增殖、分化与凋亡、器官生长、组织再生及伤口愈合等[9] [10]。哺乳动物细胞中的Hippo通路核心成分包括哺乳动物STE20样激酶1/2 (MST1/2)、蛋白质萨尔瓦多同源物1 (SAV1)、大肿瘤抑制激酶1/2 (LATS1/2)、Yes相关蛋白1 (YAP)、含WW结构域的转录调节因子1 (TAZ)和转录增强相关结构域(TEAD)家族[11]。在经典Hippo通路中，由上游激酶MST1/2和SAV1介导了一系列的磷酸化反应，转录共激活因子YAP和TAZ，YAP/TAZ磷酸化致使14-3-3蛋白募集，将它们局限于细胞质，进而降低YAP/TAZ的转录活性并抑制下游基因的表达；而当Hippo通路被抑制，YAP/TAZ可以迁移到细胞核与包含TEA结构域的序列特异性转录因子TEAD1-4结合，激活促进细胞增殖分化和抑制细胞凋亡的基因[12] [13]，这表明该通路中任何因子一旦出现突变，无法正常表达，则细胞正常的增殖、分化、凋亡均会受到影响，最终可能导致肿瘤的生成[14]。

越来越多证据表明，YAP/TAZ是Hippo通路的关键效应子[15]，其协调机械、代谢、细胞内外信号以调节机体内发育、组织稳态、炎症和肿瘤发生等生理病理过程，是细胞和器官调控的中心枢纽[16]。基于此，多项研究表明Hippo通路与癌细胞增殖、侵袭、迁移相关。在较早的关于小鼠Hippo的研究中发现，大量的YAP扩增出现在小鼠肝脏、乳腺肿瘤模型中，缺乏LAST1的小鼠有发展出软组织肉瘤、卵巢肿瘤的可能，在最近的癌症基因组图谱研究中，包括BC在内的33种癌症中广泛存在Hippo通路相关成分的突变[17]，而在单独乳腺癌基因组分析中显示，Hippo是其中最常见的信号通路之一[18]。

3. Hippo信号通路在BC中的机制

BC与多种信号通路相关，包括PI3K/AKT/mROR、Wnt/β-catenin、Hedgehog通路等[19]。Hippo通路的主要成分在细胞水平上的失调促进包括BC在内的大部分恶性肿瘤的发展、转移和耐药[20]。研究表明，YAP/TAZ活性的异常增加可以促使它充当多种组织类型的癌基因，尤其在BC中，YAP/TAZ参与了肿瘤细胞增殖、迁移侵袭、调节TME、血管生成、免疫调节等重要过程[21] [22]，而YAP/TAZ活性主要受LATS激酶调控。研究表明，TAZ耗竭降低Kruppel样因子5 (KLF5)蛋白水平抑制BC细胞增殖，而过表达YAP能上调KLF5蛋白水平，促进BC增殖[23] [24]。LAST1过表达调节CDC2激酶活性，诱导促凋亡的Bax表达，导致G2/M细胞周期停滞和细胞凋亡[25]。

3.1. 介导肿瘤细胞迁移侵袭

在肿瘤转移过程中，侵袭—转移级联反应的起始步骤是使原代区的上皮癌细胞失去极性和细胞间粘附，并转化为间充质表型，因此上皮–间充质转化(EMT)对肿瘤的侵袭-转移级联反应至关重要[26]，是肿瘤侵袭的主要机制。在EMT过程中，非运动的上皮细胞转变为具有侵袭能力的间充质表型，导致细胞迁移能力增强[27]。2006年，Overholtzer等首次发现YAP过表达诱导未转化的乳腺上皮细胞EMT，使BC细胞获得间充质特性，表现出增强的运动性和侵袭能力[28] [29]。更深入的研究发现，除了直接促进EMT，TAZ还能靶向表皮生长因子(EGFR)的配体Amphiregulin (AREG)，通过TEAD诱导AREG，异常激活ERFG通路，驱动BC细胞增殖和迁移[30]。同样，沈杰等人研究表明，YAP介导TEAD诱导贴壁斑点激酶(FAK)磷酸化，FAK是促进黏着斑(FA)形成的调节因子，FA在BC的侵袭和转移中起到重要作用[31]。白血病抑制因子受体(LIFR)是一种位于Hippo信号传导上游的乳腺癌转移抑制因子，恢复BC细胞中的LIFR表达可以激活Hippo激酶级联反应，导致YAP磷酸化、细胞质滞留及功能失活，从而抑制BC转移[32]。

3.2. 调节细胞干性

癌症干细胞(CSCs)是具有耐药性和自我更新特性的细胞亚群，其多分化性和高度自我更新能力的特点被认为可以驱动肿瘤的发生和进展。研究表明，CSCs在高分化(G1)BC中的含量远低于低分化(G3) BC，而在G3BC中YAP/TAZ靶基因显著高表达，并且TAZ蛋白水平在基因相同的异质细胞群内纯化的前瞻性CSC中特异性富集，证明TAZ是BCSC特性的重要调节因子[33]，其调节细胞干性的机制是YAP/TAZ可以诱导SOX2、NANOG、POU5F1等干性相关基因表达。此外，在针对BCSC和非BCSC衍生病灶的转录组分析中显示，TAZ在BCSC衍生肿瘤中高表达，且只有BCSC表达出转移能力，以上研究均表明Hippo转录因子TAZ是BCSC的重要介质[34]。

3.3. 促进肿瘤微环境形成

肿瘤微环境(TME)是指肿瘤细胞生存和发展的周围微环境[35]，TME为肿瘤细胞的发生发展提供了土壤。TAZ被发现可以通过调节细胞因子表达以调节TME，TAZ诱导的细胞因子之一WNT1诱导信号通路蛋白(Wisp1)被证实在浸润性BC中通过阻断IL-12信号传导和促进2型免疫以抑制1型免疫从而改变免疫TME[36]。除了细胞因子，在小鼠BC模型中，Hippo通路中的LATS1/2可促进神经细胞粘附分子1 (NCAM1) α-平滑肌肌动蛋白(αSMA)癌症相关成纤维细胞(CAF)的形成，LATS1/2耗竭会导致NCAM1αSMA CAFs比例降低，进而导致T细胞失活和功能障碍，形成免疫抑制程度较低的TME，造成癌症恶性进展[37]。有研究证明，除了血管内皮生长因子A(VEGF)，YAP1也可以介导乳腺CAF激活促进血管生成[38]，同样的，YAP/TAZ-TEAD复合物可以直接促进血管生成诱导剂(CYR61)和结缔组织生长因子(CTGF)表达，促进BC迁移和转移。

除了介导肿瘤细胞侵袭迁移、调节细胞干性、促进肿瘤微环境形成，Hippo通路在BC的免疫调节上也起到一定的作用，有研究提出了LATS1/2在癌症中具有抑制肿瘤起始和免疫原性双重功能这一模型，LATS1/2缺失提高肿瘤免疫原性，通过增强肿瘤免疫反应杀灭肿瘤细胞，这提示Hippo通路可以介导抗癌免疫应答[39]。PD-L1是一种免疫检查点分子，是介导T细胞与癌细胞相互作用的关键介质，在BC细胞中发现，Hippo通路通过TAZ和YAP调节PD-L1表达以调控T细胞活力，介导这一过程的是转录因子TEAD，并且TAZ的表达水平与PD-L1在多种BC类型细胞中表达水平相关，这强调了Hippo通路与BC免疫逃逸的相关性[40]。

4. 中药调控Hippo信号通路治疗BC

4.1. 中药单体

4.1.1. 萜类化合物

穿心莲内酯(Andro)是中药穿心莲的主要成分，Andro能有效促进YAP磷酸化，降低三阴性BC细胞中YAP及其靶基因ANKRD1蛋白的表达[41]，ANKRD1介导NF-κB、MAGE-A6通路促进BC细胞侵袭和转移[42]，因此，Andro抗BC的机制可能与促进YAP磷酸化和抑制ANKRD1的表达有关。白桦脂酸(Betulinic acid, BA)属于一种五环三萜类化合物，广泛存在于桦树、桉树、梧桐树、木瓜等多种植物中，其相关体内外研究证明，BA具有诱导BC细胞间期停滞、诱导细胞凋亡、抗血管生成等作用[43]。BA调控Hippo通路通过抑制YAP核内转运，诱导YAP磷酸化，抑制YAP-TEAD复合物形成，达到抑制BC细胞增殖分化，迁移侵袭的抗肿瘤作用[44]。

4.1.2. 皂苷类

人参皂苷(Ginsenoside) Rg3是一种从人参中分离的生物活性化合物，已有的证据表明Rg3能够特异性靶向、减少各类癌细胞模型的干细胞样特征[45]。研究证实，Rg3通过降低E-cadherin、AjubA的表达和增强BCSC中的LAST1/2磷酸化促进YAP1降解，进一步导致维持BCSC干性的YAP1靶基因SOX2和c-MYC下调，限制其核定位进而减弱BC干细胞的干性[46]。

4.1.3. 酚类化合物

和厚朴酚(Honokiol, HKL)是从厚朴中提取的联苯酚类化合物，有研究表明HKL可显著降低BC细胞内YAP/TAZ、PD-L1的表达，上调Hippo通路上游激活因子NF2的表达，并且能抑制YAP/TAZ的核转移，进而抑制恶性进展[47]，此外，HKL能抑制N-cadherin蛋白表达，诱导E-cadherin表达，这一过程常常伴随PD-L1低表达，能够抑制肿瘤免疫逃逸[48]。姜酚是中药干姜中的重要有效成分，现代药理学发现6-姜烯酚(6-Shogaol)具有抗炎、抗氧化、抗肿瘤的作用[49]。研究表明6-Shogaol能通过抑制Hedgehog通路下游转录因子Gil表达，进一步抑制Hippo通路中YAP、TEAD4的表达，抑制BC细胞侵袭迁移能力，提示Hh/Gli与Hippo/TEDA4之间存在串扰，并且6-Shogaol可能靶向Gli/TEAD4交叉对话[50]。姜黄素(Curcumin)是源于姜黄中的一种具有天然活性的多酚类化合物，可以通过作用于NF-кB、Wnt/β-catenin、Hedgehog/Gli1等多种信号通路具有抗癌作用[51]。姜黄素抑制TEAD4与粘附分子纤连蛋白(FN1)启动子的结合，下调了FN1的转录水平，抑制了小鼠BC细胞迁移和侵袭的能力。此外，姜黄素还可以降低YAP/TAZ蛋白水平，并且可以抑制Hippo通路下游CTGF和Gli2，提示姜黄素可能通过TEAD4干预Hippo信号通路[52]。天然多酚化合物白藜芦醇(trans-3,5,4-trihydroxystilbene, REV)已被证实可以抑制包括BC在内的多种癌症[53]。有研究表明，REV能通过抑制溶血磷脂酸(LPA)、表皮生长因子(EGF)诱导的YAP激活以降低YAP靶基因的表达从而减弱BC细胞侵袭，逆转LPA和EGF诱导的LATS1失活和YAP去磷酸化[54]。此外，REV通过灭活RhoA抑制LPA诱导的YAP激活，Rho GTP酶属于Ras蛋白的一类，RhoA在LPA和EGF诱导的BC侵袭中起到关键作用[55]。

4.1.4. 生物碱类化合物

粉防己碱(Tetrandrine)是防己的特征性指标成分，具有消炎镇痛、降血糖、抗肿瘤等运用效果[56]，粉防己碱可以激活BC中Hippo通路上游的MST1蛋白，进而调控下游靶基因YAP1和TAZ，使其磷酸化以抑制BC细胞增殖分化[57]。小檗碱(BBR)又称黄连素，从中药黄连中分离，是一种苦味异喹啉季生物碱，其具有多种药理学特性，包括抗菌、抗炎、抗糖尿病等。在BC细胞系体外研究中发现，其具有抑制癌细胞迁移和增殖，影响细胞活力，诱导细胞凋亡的作用[58]-[60]。小檗碱类似物在犬乳腺肿瘤细胞系中可能通过激活Hippo信号通路，介导YAP/TAZ蛋白表达降低，进而诱导肿瘤细胞凋亡[61]。

4.1.5. 黄酮类化合物

槲皮素(Quercetin)作为最常见的类黄酮化合物中的一种，已被确定是治疗BC的有效成分之一，有研究表明槲皮素可以作用于信号通路，促进BC细胞凋亡，抑制肿瘤的发展、转移[62]，具体机制可能是槲皮素能通过YAP介导Hippo 信号通路抑制BC细胞的细胞活性，改善BC耐药[63]。中药黄芪中重要活性成分之一的毛蕊异黄酮(calicosin, CA)是黄芪异黄酮类中的一种。研究表明CA可以显著抑制BC细胞的增殖、迁移，诱导细胞凋亡，其机制可能是CA通过提高NF2表达，激活MST1磷酸化调控下游YAP磷酸化，提高P-Yap表达进而阻止YAP核积累，阻滞细胞于G0/G1周期，从而调控癌细胞的增殖、迁移、凋亡[64]-[67]。木犀草素(Luteolin)是从金银花、野菊花、紫苏等多种植物中药中可提取的黄酮类化合物，木犀草素具有抗炎、抗过敏、抗肿瘤等药理作用，已被证实可以通过干预细胞周期、细胞凋亡、EMT、血管生成等过程对恶性肿瘤有显著的抑制作用[68]。木犀草素能通过抑制TNBC细胞中YAP/TAZ下游基因CTGF和CYR61的mRNA水平、降低YAP/TAZ转录活性、诱导YAP/TAZ以蛋白酶途径磷酸化实现有效抑制TNBC细胞增殖和转移[69]。芹菜素(Apigenin)是一种广泛来源于伞形科植物及多种水果蔬菜的黄酮类化合物，一些研究表明芹菜素在冠状动脉、胃肠道、恶性肿瘤等疾病方面均有一定药理作用，其作用机制与多种信号通路相关[70]。芹菜素通过降低TNBC细胞中YAP/TAZ下游靶基因CTGF和CYR61的mRNA表达，抑制其转录活性，此外，芹菜素还能破坏TNBC细胞中TAZ-TEADs蛋白相互作用，抑制YAP/TAZ-TEADs复合物活性，从而逆转TNBC细胞的恶性表型[71]。黄芩素(Baicalein)是中药黄芩中的主要活性成分，因其具有抗炎、抗病毒、免疫调节等药理作用被广泛运用于各类疾病[72]，在癌症方面，其被证实可通过抑制肿瘤细胞增殖转移和诱导细胞凋亡分化对肝癌、结肠癌等恶性肿瘤具有显著的抗肿瘤作用[73]。针对黄芩素对抗BC作用机制的研究显示，黄芩素在体外能抑制人BC细胞增殖和转移并诱导细胞凋亡，此过程伴随细胞内P-YAP水平升高和YAP水平降低，这意味着其抗BC细胞的作用机制可能与Hippo信号通路相关[74]。

4.1.6. 核苷类化合物

虫草素(cordycepin)，又名3-脱氧腺苷，是蛹虫草的主要活性成分之一。虫草素具有抑制炎症、抗氧化应激[75]，抗癌的作用，有研究表明虫草素通过下调CXCR4表达抑制人肝癌细胞的转移[76]。在关于虫草素抗三阴性BC的转录组学分析中显示，虫草素抑制了移植瘤内YAP的表达，从而抑制Hippo信号通路，此外，虫草素还能抑制TNBC中Hedgehog信号通路的异常表达，提示Hippo通路与Hedgehog信号通路间可能存在交联作用[77]。

综上所述，目前已有的研究中萜类、皂苷类、酚类、生物碱类、黄酮类、核苷类化合物均能通过Hippo信号通路作用于BC细胞，其机制大多与YAP/TAZ蛋白相关，通过抑制YAP/TAZ蛋白表达水平，抑制BC细胞增殖分化和侵袭转移，其中人参皂苷能抑制BC干细胞的干性，姜黄素可通过Hippo通路介导粘附相关分子抑制BC细胞迁移。

4.2. 中药提取物

槐耳，是药用真菌的一种，《本草纲目》记载其具有“破血”“治风”等功效，被广泛运用于炎症、结节性硬化病等疾病。当前的药理研究证实，槐耳提取物在BC、肝癌、肺癌、卵巢癌等多种癌症中具有显著的抗肿瘤活性[78]。有细胞研究试验表明，槐耳水提取物能促进三阴性BC干细胞YAP蛋白表达和细胞核定位上调，下调YAP/TAZ RNA表达，进而抑制三阴性BC干细胞增殖[79]。

紫苏叶，是中药紫苏的常用药用部位，《本草汇言》记载其解表散寒、行气宽中等功效。几项研究报道，紫苏叶提取物对结肠癌、肺癌、皮肤肿瘤等恶性肿瘤有抑制作用[80] [81]。最近研究表明，紫苏叶提取物通过上调磷酸化水平以及破坏YAP-TEAD复合物抑制YAP功能并通过LAST1/2依赖性机制抑制其转录活性[82]。

4.3. 中药复方

复方苦参注射液(compound kushen injection, CKI)是临床上常用的抗肿瘤中成药，其主要成分为苦参和白土苓，具有清热利湿、凉血解毒、散结止痛的功效，在临床上常被用作辅助药物在化疗及放疗治疗中与常规治疗联合治疗缓解癌痛[83] [84]。有动物研究发现，复方苦参注射液可以通过提高YAP磷酸化，抑制YAP核迁移，将其局限在细胞质，从而促进BC细胞凋亡[85]。

乳康饮是以疏肝健脾法为治则用于治疗乳腺癌的中药复方，主要成分为黄芪、茯苓、青皮、薏苡仁、柴胡、莪术，其涉及的信号通路有PI3K/AKT和Hippo通路。乳康饮能磷酸化YAP/TAZ，抑制YAP核内转运，从而抑制BC细胞增殖转移[86]。

5. 中药复方及提取物靶向Hippo信号通路治疗BC的方法学挑战

Hippo信号通路作为细胞增殖、凋亡调控及器官发育的核心枢纽，其由YAP/TAZ转录共激活因子、MST1/2激酶与LATS1/2肿瘤抑制蛋白等关键分子构成的动态调控网络，对药物干预的时空特异性与精准度提出严苛要求。中药复方及提取物因具有多成分协同、多靶点作用、多通路调节的复杂特性，在靶向Hippo通路的研究进程中，面临着药效物质基础模糊性[87]、通路调控机制复杂性、体内外研究脱节性[88]的关键挑战。其一，中药复方体系极为复杂，以经典方剂为例，其化学成分往往多达数百种。即便是相对单一的提取物，如总黄酮、生物碱等，也普遍存在成分异质性问题。并且，其中关键活性成分通常以痕量形式存在，例如黄芪提取物中的黄芪甲苷、人参中的人参皂苷Rg3虽已证实可调控YAP核转位，但复方中其他成分，包括多糖、有机酸等，可能通过协同增效或拮抗作用影响Hippo通路。这种多成分交互作用，导致有效成分难以精准界定，剂量–效应关系模糊不清，严重阻碍了核心作用物质的确定。其二，Hippo通路并非孤立运行，与Wnt、NF-κB、PI3K/Akt等信号通路存在广泛的交叉对话。中药复方或提取物对其调控呈现多维度特性，可能同时作用于多个通路节点。以当归芍药散为例，该方剂既可通过抑制LATS1磷酸化激活YAP，又能通过下调β-catenin间接影响Hippo通路下游靶基因[89]。这种多节点干预、多通路协同作用的特点，使得传统“单一成分–单一靶点”的研究模式，如仅依赖Westernblot检测单个蛋白，无法全面解析其调控机制，极易造成研究结果碎片化。其三，现有研究中，体外细胞模型实验通常使用纯化提取物或单一成分，虽能清晰揭示其对Hippo通路分子的直接作用，但却忽视了中药在体内复杂的代谢转化过程。例如，肠道菌群介导的成分降解，以及肝脏II相代谢反应，都可能促使部分原型成分转化为活性更强的代谢产物，其对Hippo通路的调控效应与原型成分存在显著差异。而体内动物实验虽能反映整体药效，却难以区分药物的直接作用成分与间接调控效应。这种体外机制研究与体内药效评价的脱节，使得“成分–通路–药效”的完整关联难以建立。

在现代研究思路中，基于上述几点已有挑战，可尝试以网络药理学技术从整体性、系统性出发，为中药复方及提取物靶向Hippo通路治疗BC的研究提供新策略。网络药理学基于药物–靶点–疾病相互作用网络理论，通过成分筛选–靶点预测–网络构建–拓扑分析的标准化流程，能够从中药复方及提取物复杂成分体系中快速定位调控Hippo通路的关键物质。具体而言，首先运用高效液相色谱(HPLC)、质谱联用(LC-MS)等分析技术对中药成分进行定性定量筛选，结合TCMSP、TCMID等专业数据库进行潜在活性成分的提取；随后，通过Swiss Target Prediction、Pharm Mapper等预测平台，对筛选成分进行靶点预测，构建成分–靶点相互作用网络；进一步运用Cytoscape软件构建中药成分–靶点–Hippo通路–BC多层次网络，利用拓扑学分析算法，识别网络中连接度(Degree)、介数中心性(Betweenness Centrality)等关键指标较高的核心节点成分与靶点[90]。该方法不仅能够突破传统单一成分研究的局限性，还能从系统层面揭示中药复方多成分协同作用于Hippo通路的分子机制，为后续活性成分验证和作用机制解析提供精准导向。

6. 结语与展望

Hippo信号通路是人类恶性肿瘤中最常见的失调通路之一，其关键因子YAP/TAZ被认定为癌蛋白，MST1/2、LAST1/2也被鉴定为肿瘤抑制因子。在BC中，Hippo通路作为一个具有致癌和抑癌双重作用的因素，在大部分情况下Hippo通路的失调会导致BC细胞的增殖、分化、侵袭和迁移，促进EMT和血管生成，促进免疫逃逸等，这导致了BC易出现进展迅速、晚期转移、耐药性和不良预后等治疗障碍，本文通过对近年中药单体、中药提取物及中药复方介导Hippo通路治疗BC的研究文献进行综述，发现中药主要是通过抑制细胞增殖分化、抑制干细胞干性、促进细胞凋亡、阻滞细胞周期、抑制EMT、抑制细胞粘附等过程，以及与NF-κB、MAGE-A6、Hedgehog等信号通路的串扰对BC治疗发挥作用。

当然，目前对这一领域的研究亦存在不足：① 整体来看，中药调控Hippo通路治疗BC的研究不足，尤其是关于中药提取物和中药复方的研究甚少，还有大量研究空间；② 中药对Hippo信号通路的调控机制目前发现较为单一，集中在抑制细胞增殖分化，有少量关于抑制干细胞干性、诱导细胞凋亡、抑制EMT的研究，对于血管生成、免疫逃逸等已阐明的机制仍缺乏研究；③ 相关研究现阶段均停留在细胞和动物研究阶段，缺少临床试验进一步证实其有效性；④ 在已归纳的研究中，涉及多个信号通路及靶点，它们与Hippo通路相互作用，共同介导了BC的恶性进展。中药作用特点是多靶点、多途径、多层面的，但目前在抗BC的研究上尚未得到证实，是否能寻找到有效的成分针对各通路串扰的关键靶点是需要深入研究的重点。⑤ 中药复方及其提取物以其多组分协同效应、多靶点作用模式及多通路调控机制的复杂特性，在靶向Hippo信号通路的深入研究进程中，衍生出药效物质基础模糊性、通路调控机制复杂性、体内外研究脱节性的亟待攻克的关键问题。

综上所述，中药调控Hippo通路治疗BC虽缺乏详细的研究数据和临床实践证实其可行性，但其前景是可预见的。在接下来的研究中，应对通路机制进行更深入的剖析，尝试运用网络药理学技术突破传统中药单一成分研究的桎梏，从系统生物学视角出发，深度解析中药复方多成分对 Hippo通路的协同调控网络，精准锁定关键作用靶点与信号节点，为活性成分筛选及作用机制阐释提供明确方向指引，并从多层面研究更多的中药单体、中药提取物和中药复方的抗肿瘤机制，指导开发高通量筛选平台，以中药资源库为筛选对象，通过系统性研究，筛选并发现可靶向调控YAP-TEAD相互作用的新型、高效抑制剂，把握中药复合性的优势，研发有效、安全、剂型丰富的中药制剂，为BC的治疗提出行之有效的中医方案。

致 谢

在此对老师的指导以及引用文献的所有者，表示由衷的感谢。

NOTES

^*通讯作者。