1. 引言
真菌多糖是一类天然高分子化合物，广泛存在于真菌特别是大型真菌的细胞壁中，由醛基和酮基通过糖苷键连接起来，有螺旋状的三维立体结构，其构型近似于DNA，是一种β型的多糖。在国际上，真菌多糖被称为“生物反应调节物(biological response modifier)”，简称“BRM”，能够控制细胞分裂分化，调节细胞生长，具有抗病毒，抗突变，抗衰老，抗辐照，提高免疫力等多种生物活性 [1] 。真菌多糖研究已成为当今新药发展的方向之一，在国际上引起了日益广泛的重视。云芝(Coriolus versicolor)又称彩绒革盖菌、杂色云芝、彩绒菌、瓦菌。隶属担子菌亚门，层菌纲，非褶菌目(多孔菌目)，多孔菌科、栓菌属，云芝多糖由云芝或从其发酵液中分离提取，具有突出的药食用功效和生物活性，分子量在1.3 × 106以上，它是含有β—糖苷键的葡聚糖，并测出是β(1→3)和β(1→6)糖苷键，云芝提取物的主要活性成分是云芝多糖。云芝多糖从云芝菌丝体和发酵液中提取的多糖均具有极强烈的抑制癌细胞活性 [2] 。本试验研究了云芝多糖对烟草马铃薯Y病毒抑制作用及田间防治效果。
2. 材料与方法
2.1. 云芝多糖水剂抗PVY抑制活性的测定
2.1.1. 供试材料
1.1%云芝多糖水剂(由西北农林科技大学提供)；
0.5%香菇多糖水剂(北京燕化永乐农药有限公司生产)；
20%病毒A可湿性粉剂(齐齐哈尔市北方化工研究所研制生产)；
PVY病毒(中国农业科学院烟草研究所提供)，在接种前30天左右在心叶烟(Nicotiana glutinosa)上繁殖备用；
苋色藜(中国农业科学院烟草研究所提供)，为PVY枯斑寄主；
心叶烟(中国农业科学院烟草研究所提供)；
烟草品种K326(中国农业科学院烟草研究所提供)，为PVY的系统侵染寄主。
2.1.2. 试验方法
1) 试验设计：设四个处理，每处理3株，3次重复。
处理1：在喷施1.1%云芝多糖水剂600倍液24 h后接种PVY；
处理2：在喷施0.5%香菇多糖水剂500倍液24 h后接种PVY；
处理3：在喷施20%病毒A 500倍液24 h后接种PVY；
处理4 (CK)：在喷施清水24 h后接种PVY作为对照处理。
2) 接种方法：采用摩擦接种方法，烟苗5~6片叶时，移栽至直径20 cm一次性塑料花盆。成活后，采用高压喷枪摩擦接种。采集经免疫检测试纸检测为PVY的新鲜病叶，在无菌研钵中，用PVY接种缓冲液(0.01 mol/L pH 7.0磷酸盐缓冲液 ＋ 0.4%亚硫酸钠)研磨，用双层纱布过滤，调整接种液的浓度为1:300 (重量体积比)。接种前在病毒汁液中加入1%过孔径0.075 mm筛孔的化学纯二氧化硅。高压喷枪喷射压力为1 Pa，喷枪口距离接种物20 cm，每株喷射接种时间约为0.5 s。接种后立即用喷壶喷少量自来水，提高接种效率。
3) 调查及计算方法：调查心叶烟枯斑数，计算病斑抑制率。
病斑抑制率 % = [(对照枯斑数 − 处理枯斑数)/对照枯斑数] × 100
2.2. 云芝多糖水剂防治烟草马铃薯Y病毒田间药效试验
2.2.1. 供试材料
供试品种为中烟90。
2.2.2. 试验地点
试验地设在中国农科院烟草研究所西昌基地烟田(西昌市大兴乡)，位于川西高原海拔2000左右，东经101˚46'~101˚53'、北纬27˚02'~27˚10'。烤烟生长期间气温日差较大的气温特点，主要受亚热带季风季候控制，因为地理位置的特殊，东南季风，西南季风对其都有影响太平洋和印度洋的的水汽均可到达这里，适合于优质烤烟生产。选择烟草马铃薯Y病毒往年发病田块，面积0.23 hm2，前茬为烟茬，667 m2施烟草专用肥32.5 kg，磷酸二铵7.5 kg，豆粕20.0 kg，硫酸钾20.0 kg，追肥硝酸钾7.5 kg。于5月1日移栽，栽培管理措施按当地优质烟生产技术规范实施。
2.2.3. 试验设计
试验设1.1%云芝多糖水剂600倍液、0.5%香菇多糖水剂500倍液、20%病毒A500倍液、清水对照4个处理，3次重复，试验小区随机区组排列，每小区40 m2。
2.2.4. 施药方法
按各处理药剂的浓度配比药液，应用背负式手动喷雾器于发病前(6月2日)在小区内均匀喷洒，间隔3~4 d施药1次，连续3次，自上而下对叶面均匀喷雾。3次施药都在傍晚无降雨时喷施。
2.2.5. 调查方法
施药10 d后调查各小区的全部烟株，取其平均数。
1) 病情分级标准
0级：全株无病。
l级：心叶脉明或轻微花叶，病株无明显矮化。
3级：三分之一叶片花叶但不变形，或病株矮化为正常株高的四分之三以上。
5级：三分之一至二分之一叶片花叶，或少数或变形或主侧脉坏死，或植株矮化为正常的三分之二至四分之三。
7级：二分之一至三分之二叶片花叶，或变形或主侧脉坏死，或植株矮化为正常的二分之一至三分之二。
9级：全株叶片花叶，严重变形或坏死，病株矮化为正常株高的二分之一以上。
2) 发病率、病情指数、及相对防效等计算方法
发病率 = (发病株数/调查总株数) × 100%；
病情指数 = 100 × ∑(各级病株数 × 各级值)/(调查总株数 × 最高级值)；
相对防效 = (对照病情指数-处理病情指数)/对照病情指数 × 100%。
3) 处理间差异显著性采用方差分析：采取均数差别的显著性检验，步骤：
(a) 提出原假设：H0——无差异；H1——有显著差异；
(b) 选择检验统计量：采用的检验F统计量，即F值检验；
(c) 计算检验统计量的观测值和概率P值：该步骤的目的就是计算检验统计量的观测值和相应的概率P值；
(d) 给定显著性水平，并作出决策。
3. 结果与分析
3.1. 不同药剂对PVY侵染保护效果
1.1%云芝多糖水剂300倍液、20%病毒A500倍液、0.5%香菇多糖水剂200倍液对PVY侵染保护效果见表1，1.1%云芝多糖水剂600倍液对PVY侵染的活体保护作用效果最高，保护效果为83.85%，0.5%香菇多糖水剂500倍液对PVY侵染的活体保护效果为75.67%，病毒A 500倍液保护效果为72.2%。由此可见，在枯斑寄主苋色藜上云芝多糖水剂对PVY的侵染表现出较好的保护活性。
3.2. 对烟草马铃薯Y病毒病防治效果
几种药剂对烟草马铃薯Y病毒病防治效果见表2。喷施1.1%云芝多糖水剂的烟田平均病情指数为1.65，比对照区减少了8.13，平均防效达83.12%；喷施0.5%香菇多糖水剂的烟田平均病情指数为5.35，比对照区减少4.43，平均防效达45.29%；喷施20%病毒A500倍液的烟田平均病情指数为6.23，比对照区减少3.55，平均防效达36.29%。可见，1.1%云芝多糖水剂、0.5%香菇多糖水剂、20%病毒A对马铃薯Y病毒病均有一定的防治效果，其中，1.1%云芝多糖水剂防治效果最好，0.5%香菇多糖水剂与20%病毒A防效接近，但效果次于云芝多糖。方差分析表明，1.1%云芝多糖水剂的平均防效与0.5%香菇多糖水剂、20% 病毒A可湿性粉剂达极显著水平。
4. 讨论
沈小英等 [3] (2012)研究表明，云芝多糖能有效抑制TMV，并可促进烟苗生长，提高烟叶产量及品质，谢咸升(2016) [4] 研究认为，云芝多糖可通过复杂的分子调控途径诱导本氏烟抗性基因抑制TMV侵染，
Table 1. Different agents on PVY infection lesion inhibition rate
表1. 不同药剂对PVY侵染病斑抑制率
Table 2. 10 d after spraying chemicals to tobacco potato virus Y disease prevention effect
表2. 喷药10 d后几种药剂对烟草马铃薯Y病毒病防治效果
注：相对防效差异显著性5%表示处理间差异达显著水平(P < 0.05), 相对防效差异显著性5%表示处理间差异达极显著水平(P < 0.01)。
本研究通过云芝多糖PVY室内活性测定及大田小区试验初步判明对PVY也有抑制及防治作用，TMV与PVY同属烟草病毒类病害，作者分析认为云芝多糖对烟草病毒类病害应有抑制及防治作用。
云芝多糖水剂对马铃薯Y病毒病防治作用还必须通过烟田大面积示范才能确定其对烟草马铃薯Y病毒病防治效果。
5. 结论
通过云芝多糖水剂抗PVY室内活性测定表明1.1%云芝多糖水剂具有较高的抗PVY活性，施用云芝多糖水剂可以有效抑制植株中PVY活性。
大田小区试验1.1%云芝多糖水剂对马铃薯Y病毒病防效达83.12%极显著高于其他两种防病毒制剂，说明云芝多糖对PVY有防治作用是十分明显的。
基金项目
湖南省烟草公司重点科研项目(项目编号：14-16ZDAa02)。
NOTES
*通讯作者。