1. 引言
宫颈癌在全球女性常见恶性肿瘤中稳居第四，据统计，2018年全球约有57万妇女被诊断为宫颈癌，约31.1万名妇女死于该疾病，严重危害妇女身体健康[1]。Arbyn [1]等人认为，在所有年龄段的女性中，宫颈癌的发病率是所有癌症的三倍。故而早期筛查和有效诊断可以将宫颈癌发病率和病死率降低90%以上[2]。在宫颈癌的整个病程中人乳头瘤病毒(Human Papilloma Virus, HPV)起着重要作用。HPV作为一种感染源，它的成功不在于引起疾病的能力，而在于与机体建立长期感染的关系，并通过癌蛋白E6、E7的表达来驱动肿瘤的发生。1995年，世界卫生组织(WHO)指出高危型人乳头瘤病毒(HPV)长期感染可使患宫颈癌的风险增加250倍[3] [4]。本文旨在通过HPV E6/E7 mRNA检测及薄层液基细胞学检测(Thinprep Cytologic Test, TCT)及两者联合检测在宫颈癌早期筛查中的数据分析，寻找到一种高符合率的检测方法，来提升宫颈癌早期的检出率。
2. 资料与方法
2.1. 一般资料
选取2018年1月~2022年12月于延安市人民医院进行宫颈癌筛查且宫颈活检为阳性的674例患者作为研究对象。纳入标准：1) 在同一时间采集标本进行HPV E6/E7 mRNA和宫颈液基细胞学(TCT)检查的宫颈异常的患者；2) 年龄在20~60岁；3) 既往未接受过任何形式的宫颈治疗；4) 非妊娠女性。排除标准：1) 既往有HPV感染史或宫颈治疗史；2) 有免疫抑制治疗史者；3) 存在其他脏器恶性肿瘤；4) 标本采集不满意的患者。
2.2. 方法
2.2.1. HPV E6/E7 mRNA检测
采用宫颈稳态检测试剂盒(郑州科蒂亚生物技术有限公司)进行检测，该试剂盒是基于转录介导的恒温扩增技术，以HPV致癌基因E6/E7的mRNA为检测靶标，通过对标本裂解、目的mRNA捕获转录介导的等温扩增和杂交保护测定对扩增物进行化学发光检测。16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68高危型可被检测到。其检测探针是针对14种高危HPV的E6/E7 mRNA，只要其中任一种存在就显示阳性。严格按照试剂盒说明进行操作，定性检测标本是否存在HPV mRNA。
根据E6/E7 mRNA的拷贝数、产品临床实验阈值等由配套软件自动判读检测结果，≥1.0为阳性，<1.0为阴性。
2.2.2. TCT
在宫颈充分暴露的情况下，检测者将无菌采样器置于受检者宫颈管的移行带，并将其顺时针旋转数圈后将刷头置于保存液中并充分震荡，确保细胞能最大限度地进入保存液中，后经自动化系统处理制成涂片，再经95%酒精固定及巴氏染色，最后根据TBS细胞学分析系统进行细胞病理诊断[5]。NILM为阴性，除此之外均为阳性。
2.2.3. 病理活检
标本经10%的中性福尔马林固定，常规脱水、石蜡包埋、制片及光镜观察。结果分为阴性和阳性，正常和慢性炎症属于阴性，其余为阳性。
2.2.4. 结果判定
该切片均由两位高级职称的病理诊断医师进行复阅，诊断准确。
2.2.5. 统计学处理
以SPSS 20.0统计软件展开相关数据分析处理，以百分比表示计数资料，用χ2检验进行比较，检验水准α = 0.05。P < 0.05表示差异有统计学意义。
3. 结果
3.1. HPV E6/E7、TCT检查结果分析
本组研究显示：HPV E6/E7 mRNA 448例呈现阳性表达、226例呈现阴性表达，阳性符合率66.47%；TCT 371例呈现阳性表达，303例呈现阴性表达，阳性符合率55.04% (表1)。
Table 1. Analysis of HPV E6/E7 and TCT test results (n)
表1. HPV E6/E7、TCT检查结果分析(n)
方法 |
结果 |
合计 |
HPV E6/E7 |
阳性 |
448 |
(n = 674) |
阴性 |
226 |
TCT |
阳性 |
371 |
(n = 674) |
阴性 |
303 |
合计 |
|
674 |
3.2. HPV E6/E7与TCT检查结果一致性分析
HPV E6/E7、TCT检查结果的一致性为63.35% (427/674)，其中：两种方法均呈现阳性表达为286例、两种方法均呈现阴性表达为141例、呈现TCT阴性表达而HPV E6/E7阳性表达为162例，呈现TCT阳性表达而HPV E6/E7阴性表达为85例(表2)。
3.3. HPV E6/E7、TCT对宫颈病变价值分析比较
HPV E6/E7、TCT相对于两者联合检测分析阳性符合率较低，差异存在统计学意义(P < 0.05) (表3)。
Table 2. Consistency analysis of HPV E6/E7 and TCT test results (n)
表2. HPV E6/E7、TCT检查结果一致性分析(n)
TCT (n = 674) |
E6/E7 (n = 674) |
合计 |
阳性 |
阴性 |
阳性 |
286 |
85 |
371 |
阴性 |
162 |
141 |
303 |
合计 |
448 |
226 |
674 |
Table 3. Comparison of diagnostic value of HPV E6/E7 and TCT for cervical lesion (%)
表3. HPV E6/E7、TCT对宫颈病变诊断价值比较(%)
方法 |
阳性 |
阴性 |
符合率 |
HPV E6/E7 (n = 674) |
448 |
226 |
66.47% |
TCT (n = 674) |
371 |
303 |
55.04% |
联合检测(n = 674) |
553 |
141 |
79.08% |
x2 |
|
|
41.762 |
P |
|
|
<0.05 |
4. 讨论
宫颈癌是世界上常见的妇科肿瘤之一，发生率和死亡率居女性恶性肿瘤前列，近年来发病人群年轻化趋势明显。目前研究认为，宫颈癌的发生与HPV的持续感染存在密切关联[6] [7]。HPV作为一种感染源，它的成功不在于引起疾病的能力，而在于与机体建立长期感染的关系，99%以上的宫颈癌是由高危人乳头瘤病毒(HR-HPVs)持续感染导致的[6] [7]。
HPV介导转化的关键驱动因素是癌蛋白E5、E6和E7。它们共同作用是延长细胞周期进程，延缓分化和抑制宿主角质形成细胞的凋亡，以产生一个允许病毒复制的环境[8] [9]。且Sotirija等[10]的动物实验也发现HPV E6、E7蛋白过度表达会抑制抑癌基因表达而激活端粒酶，影响细胞周期的调控，使细胞增殖率上升，发生癌变。有研究报道HPV E6/E7 mRNA检测在宫颈癌筛查中有较高价值，可作为宫颈癌病变启动监测指标[11] [12]。WHO宫颈癌前病变筛查和治疗指南明确提出增加HPV E6/E7 mRNA检测作为宫颈癌的筛查项目[13]。本研究显示674名宫颈病变患者HPV E6/E7阳性患者448例，符合率为66.47%。
液基薄层细胞学检查(TCT)作为一种应用较普遍的细胞学检查技术，已广泛应用。但由于其检测结果受检测者的主观意识影响，符合率只有60.25% [14]。本研究中TCT阳性371例，阴性303例，组织符合率为55.04%，漏诊的机率较高，与文献报道相似[14] [15]。由此可以看出仅靠TCT难于完成宫颈病变的筛查。
研究显示HPV E6/E7 mRNA检测及薄层液基细胞学检测(Thinprep Cytologic Test, TCT)联合检测符合率明显高于单一检查，提示此方法可以让两者互补，提高检出率，降低漏诊率。
综上所述，本研究表明两者联合使用可以优势互补并有助于宫颈癌早检查、早发现、早治疗，降低癌症的发生。
基金项目
延安市科技计划项目(SL2022SLSFGG-013)。
NOTES
*第一作者。
#通讯作者。